[发明专利]一种单一病毒收获液的生产方法

说明书

本发明属于疫苗生产技术领域，具体涉及一种单一病毒收获液的生产方法。本发明的方法包括如下步骤：(1)将地鼠肾制备成单分散的地鼠肾细胞，采用细胞工厂密闭培养地鼠肾细胞，所述细胞工厂的层数n与地鼠肾的用量m的关系为：m＝n×2.25，m的单位为对；(2)所述地鼠肾细胞生长为致密单层后，将所述地鼠肾细胞感染病毒，培养后收获。采用本发明方法生产单一病毒收获液具有稳定、生产效率高和产量大的优点，本发明生产的病毒可进一步用作原料生产相应疾病的疫苗，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于疫苗生产技术领域，具体涉及一种单一病毒收获液的生产方法。

背景技术

细胞工厂是一种用于生产生物化学产品的反应装置，其设计通常是以产品的高效生产为理念，并在此过程中是遵循以下五大准则：(ⅰ)构建一条由原料到产品的最优合成途径；(ⅱ)平衡代谢途径中每步反应的代谢流，使该途径代谢通量远高于细胞基础代谢；(ⅲ)足量地供应合成途径的前体，多个前体根据需要调整供应比例；(ⅳ)酶促反应往往有各种辅因子的参与，顺畅的代谢通路需要平衡或者再生各种辅因子；(ⅴ)通过遗传改造或者工艺改进解除产物和代谢中间体的反馈抑制，以获取更高的产量。细胞工厂在疫苗生产中已经有较广泛的应用。例如，将其用于生产并收获乙型脑炎病毒、森林脑炎病毒和狂犬病毒等病毒，进而获得对应疾病的疫苗生产原料。“中国发明专利申请CN201910924577.4一种基于细胞工厂的森林脑炎病毒的制备方法”提供了一种利用细胞工厂首先培养地鼠肾细胞，然后利用生长出的地鼠肾细胞培养用于制备疫苗的森林脑炎病毒的方法。

现有的细胞工厂在培养过程中通常采用静置敞口的方式，然而这种方式难以保证每层的通气量稳定，影响培养效果和产量。然而，如果改用密闭培养的方式，则细胞产生的酸和二氧化碳容易导致培养体系的pH不稳定，影响细胞和病毒的生长。此外，在密闭培养的方式下，也不能加入碳酸氢钠等pH调节剂对后续产生的酸和二氧化碳进行缓冲，使得体系pH过高导致细胞不贴壁，影响细胞的生长，该问题导致目前细胞工厂的培养过程实际上不能够实现密闭培养的方式。

因此，需要对现有细胞工厂的培养方法进行改进。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明提供一种单一病毒收获液的生产方法，目的在于实现细胞工厂的密闭生产，有效维持通气量及pH的稳定，实现稳定、高产量的收获。

一种单一病毒收获液的生产方法，包括如下步骤：

(1)将地鼠肾制备成单分散的地鼠肾细胞，采用细胞工厂密闭培养地鼠肾细胞，所述细胞工厂的层数n与地鼠肾的用量m的关系为：m＝n×2.25，m的单位为对；用于培养地鼠肾细胞的细胞生长液的初始pH为7.0-7.5，优选为7.4-7.5。

制备单分散的地鼠肾细胞的方法为：采用胰蛋白酶消化液于2-8℃消化地鼠肾16-20h；所述胰蛋白酶消化液的用量为每对地鼠肾2-4ml，所述胰蛋白酶消化液的pH为7.0-7.8，其含有重量百分比0.1％的胰蛋白酶和32IU/ml的硫酸庆大霉素；

(2)所述地鼠肾细胞生长为致密单层后，将所述地鼠肾细胞感染病毒，培养后收获单一病毒收获液。

优选的，所述病毒为乙型脑炎病毒、森林脑炎病毒或狂犬病毒。

优选的，所述细胞工厂的层数为40层，使用的地鼠肾的用量为90对。

优选的，步骤(1)的具体步骤为将分散为单细胞的地鼠肾细胞分装至细胞工厂，每层细胞工厂加入细胞生长液200-300ml，36-38℃培养68-72h，即得生长成致密单层的地鼠肾细胞。

优选的，步骤(1)中，用于培养地鼠肾细胞的细胞生长液含体积百分比5％-8％的新生牛血清、重量百分比0.2-0.3％的水解乳蛋白和0.01g/L的谷氨酰胺。