[发明专利]一种NK细胞扩增用培养基及培养方法

说明书

本发明公开了一种NK细胞扩增用培养基，由以下成分组成，基础培养基、钨酸铋微粉、洋蓟素、橄榄苦甙、甘油磷脂、葡萄糖、IL‑2、IL‑4、IL‑15、谷氨酸、精氨酸。本发明提供的NK细胞扩增用培养基，添加钨酸铋微粉能有效促进NK细胞的活化，提高细胞活力，促进NK细胞的分裂增殖。培养基中还添加洋蓟素、橄榄苦甙减少NK细胞在培养过程中的损伤，起到修复细胞作用，添加甘油磷脂保护细胞膜，提高NK细胞的保水增殖能力。上述成分和培养基中葡萄糖、IL‑2、IL‑4、IL‑15、谷氨酸、精氨酸等成分共同作用有效提高NK细胞的扩增效率，培养得到的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性较好。

技术领域

本发明涉及免疫细胞领域，尤其涉及一种NK细胞扩增用培养基及培养方法。

背景技术

自然杀伤细胞( natural killer cell，NK细胞)来源于骨髓淋巴样干细胞，其分化、发育依赖于骨髓及胸腺微环境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴结。NK细胞自产生具备能够准确区分自身和外界的能力，及时找出非自身之物并去除，因此称作自然杀伤(NK)细胞。NK细胞不同于T、B细胞，是一类无需预先致敏就能非特异性杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的淋巴细胞。NK细胞是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、 抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别靶细胞、杀伤介质。同时对人体内的T淋巴细胞及B淋巴细胞具有一定的调节作用。

NK细胞不仅可以清除人体内寄生菌、病毒及老化变异细胞，对癌细胞也具有极强的清除作用，目前在临床上利用NK细胞过继性免疫治疗成为了肿瘤细胞免疫治疗的重要手段。NK细胞数量与NK细胞对肿瘤细胞的杀伤效果有关。

目前制约NK细胞的临床应用的主要障碍之一就是难以得到足够数量的NK细胞。如何在体外实现NK细胞大规模扩增是目前NK细胞治疗的关键问题。外周血中NK细胞仅占很小的部分。而肿瘤病人的外周血中往往NK细胞的数量和活性有明显的下降。现有的培养过程往往存在培养时间长，细胞收率低的问题。培养基中往往需要添加胎牛血清或者自体血浆，血液制品由于其成分的不明确性，存在一定的安全隐患，并且存在个体差异。因此，如何优化NK细胞体外培养的培养基、提高NK细胞增殖活性对NK细胞的临床应用有重大意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种NK细胞扩增用培养基，不添加胎牛血清和其他血液制品，成分安全明确，有效提高NK细胞的体外扩增效率。

本发明的目的之二在于提供一种NK细胞的扩增方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种NK细胞扩增用培养基，由以下成分组成，基础培养基、钨酸铋微粉、洋蓟素、橄榄苦甙、甘油磷脂、葡萄糖、IL-2、IL-4、IL-15、谷氨酸、精氨酸。

优选地，各成分在培养基中的终浓度为：钨酸铋微粉5.2-6.5ng/mL、洋蓟素2.2-3.4 ng/mL、橄榄苦甙3.5-4.5 ng/mL、甘油磷脂1-4μg/mL、葡萄糖10-15μg/mL、IL-2 5-10μg/mL、IL-4 10-15μg/mL、IL-15 2-5μg/mL、谷氨酸12-18μg/mL、精氨酸20-25μg/mL。

优选地，各成分在培养基中的终浓度为：钨酸铋微粉5.7ng/mL、洋蓟素2.9 ng/mL、橄榄苦甙4 ng/mL、甘油磷脂3μg/mL、葡萄糖12μg/mL、IL-2 8μg/mL、IL-4 13μg/mL、IL-15 3μg/mL、谷氨酸15μg/mL、精氨酸22μg/mL。

优选地，所述钨酸铋微粉的平均粒径为3-9μm。

优选地，所述基础培养基为RPMI-1640培养基。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种NK细胞的扩增培养方法，采用上述的培养基培养。