[发明专利]一种利用混合抗体捕获法筛选VHH/scFv的方法有效
| 申请号： | 202111312458.7 | 申请日： | 2021-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN114088947B | 公开（公告）日： | 2023-10-13 |
| 发明（设计）人： | 荣乃燕;陈佳婧;周涛;刘洁颖;王卓智 | 申请（专利权）人： | 上海药明生物医药有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N21/552 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 刘昌荣 |
| 地址： | 201403 上海市奉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 混合 抗体 捕获 筛选 vhh scfv 方法 | ||
1.一种利用混合抗体捕获法筛选VHH/scFv的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)优化捕获条件：
先将单独的抗Myc标签抗体和单独的抗His标签抗体以不同比例混合，获得混合抗体，对芯片进行活化后，再使用所述混合抗体包被于所述芯片上，使用缓冲液将VHH稀释至不同浓度，使VHH流经所述芯片，并与包被在芯片上的抗体发生特异性结合，进行SPR检测并分析计算包被抗体与VHH的表观解离速率常数即表观kd；
比较混合比例不同的抗体和不同浓度VHH的表观解离速率常数，选取使用不同浓度VHH时表观解离速率常数都较小的混合比例作为最优捕获条件；
2)在最优捕获条件下，利用混合抗体捕获法进行VHH/scFv的筛选：
先将抗Myc标签抗体和抗His标签抗体以步骤1)中获得的最优混合比例混合，再将混合抗体包被到活化后的芯片上，使VHH/scFv流经所述芯片，并与包被在芯片上的混合抗体发生特异性结合；
以不同浓度的抗原作为分析物进行SPR检测，分析计算VHH/scFv与抗原的解离速率常数kd。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，抗Myc标签抗体和抗His标签抗体的混合比例分别为1：3、1：2、1：1、2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、仅添加抗His标签抗体和仅添加抗Myc标签抗体。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述活化是指利用活化剂活化SPR传感芯片，所述包被是指将混合抗体与SPR传感芯片进行共价偶联。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述SPR传感芯片为CM5芯片，所述CM5芯片在完成结合和解离后，使用浓度为10mmol/L的甘氨酸溶液进行芯片再生，所述甘氨酸溶液的pH值设置为1.5。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述VHH的稀释浓度分别为0.2μg/mL、1μg/mL和5μg/mL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述VHH和混合抗体结合后，解离时间设置为600-3600s。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述最优混合比例是指按照4：1～7：1的比例混合抗Myc标签抗体和抗His标签抗体，且混合抗体的饱和浓度为30μg/mL。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述VHH/scFv和抗原的结合时间设置为120s，解离时间设置为1200-1800s。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述抗原为不含有Myc标签和His标签的抗原，包括但不限于无标签抗原和半Fc标签抗原。
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