[发明专利]一种抑制肿瘤干细胞的方法在审
| 申请号： | 202111312546.7 | 申请日： | 2021-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN114045259A | 公开（公告）日： | 2022-02-15 |
| 发明（设计）人： | 牟晓东;牟艳玲;甘元善;戴晓宇;李栋;姚庆强;刘蕾 | 申请（专利权）人： | 山东第一医科大学（山东省医学科学院） |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;C12N5/095 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250000 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抑制 肿瘤 干细胞 方法 | ||
1.一种抑制肿瘤干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）生产和收集高活性T淋巴细胞外泌体；
（2）整合外泌体和视黄醛；
（3）作用于肿瘤细胞。
2.根据权利要求1所述的抑制肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤（1）的过程为：
将T淋巴细胞悬浮培养至1x105细胞/mL，以乙醛脱氢酶ALDH活性为标准，筛选高ALDH1活性的T淋巴细胞，将T淋巴细胞导入3D培养系统进行培养扩增，收集培养液中的外泌体。
3.根据权利要求1或2所述的抑制肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤（1）的过程为：将T淋巴细胞初步培养扩增到约5x104细胞数量后，根据其ALDH的活性进行分离筛选，分离出含有20%以上的ALDH活性最高的细胞；经培养扩增至第4至6代时，转入3D的胶原蛋白制成的组织工程细胞骨架进行立体细胞培养，基础培养液是RPMI细胞培养基，其它添加剂包括胎牛血清，IL-2和CD137单克隆抗体；培养，外泌体在细胞培养液中的最终浓度可达到3mg/ml~20 mg/ml；外泌体经过低温超高速离心提取获得。
4.根据权利要求1所述的抑制肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤（2）的过程为：将外泌体重新悬浮溶解于PBS中，加入视黄醛将混合物温育即得。
5.根据权利要求4所述的抑制肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述的视黄醛为全反式视黄醛。
6.根据权利要求1所述的抑制肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤（3）的过程为：将整合了视黄醛的外泌体溶解于生理盐水中，放入肿瘤细胞中；外泌体连续使用，进行考察肿瘤细胞的情况。
7.根据权利要求6所述的抑制肿瘤干细胞的方法，其特征在于，整合了视黄醛的外泌体在生理盐水中的最终浓度为40mg/ml~60mg/ml；每1~3天使用一次，连续使用14~28天。
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