[发明专利]一种用于预防阿尔兹海默症的核桃多肽及其应用

说明书

本发明公开了一种用于预防阿尔兹海默症的核桃多肽及其应用，所述核桃多肽自N端到C端的氨基酸序列为Glu‑Pro‑Glu‑Val‑Leu‑Arg。本发明从核桃粕提取核桃蛋白，用胰蛋白酶对核桃蛋白进行酶解得到核桃多肽，1 kDa超滤膜分离后用LC‑MS/MS鉴定多肽的组成。根据液质结果及分子对接模拟多肽与乙酰胆碱酯酶的相互作用，筛选出1条具备改善记忆功效的多肽。通过小鼠实验证明了其可有效改善D型半乳糖带来的脑力损伤，证实其具有预防阿尔兹海默症（AD）的潜力。脑组织HE染色、体外抗氧化实验验和分子对接模拟证实其可减少海马区蛋白斑块、降低体内氧化应激和抑制乙酰胆碱酯酶活性、预防AD。另外，本发明从核桃粕中酶解制备核桃多肽，不仅步骤简便，而且有利于提升核桃价值。

技术领域

本发明属于多肽技术领域，具体涉及一种来源于核桃粕的可预防阿尔兹海默症的多肽。

背景技术

学习和记忆功能是大脑的高级功能，是人类生存的必备能力之一，一直受到高度重视。学习记忆功能障碍常是多种疾病的症状，如脑外伤、智力低下、应激性创伤引起的记忆障碍、柯萨可夫综合征、痴呆、一氧化碳中毒等。随着人口老龄化，痴呆症患者的数量迅速增加。阿尔茨海默病（AD）是痴呆症的一种主要形式，给家庭成员和社会带来沉重的精神和经济负担，受到研究人员的广泛重视。《2018年世界阿尔茨海默病报告》指出，全球每三秒就有一例痴呆症病例。2018年，全球有5000万AD患者，预计到2050年将增加两倍。到目前为止，已有多种药物被批准用于轻中度AD，其中包括：多奈哌齐和加兰他敏等。经过研究发现，它们总体的治疗效果是适度的，但是对长期疾病进展没有影响。而且，现有数据不支持这些药物在非常轻微的AD中使用，即早期AD病人中不支持使用。此外，AD患者在出现临床症状前15～20年，其病理就已经在其大脑中积累，AD其实是一种生物疾病的晚期阶段。因此，早期预防或许是不错的AD治疗策略之一。

据报道，氧化应激是AD发病机制、疾病进展和逐渐积累的早期变化之一。氧化应激是体内氧化和抗氧化失衡的一种状态，其特征是体内活性氧（ROS）和活性氮（RNS）等自由基显着增加。随着氧化应激的发生，大量的ROS和RNS在体内蓄积，导致蛋白质氧化和脂质过氧化，引起蛋白质和脂质的结构和功能紊乱。大脑作为耗氧量高的器官，抗氧化能力较弱，容易被自由基破坏。大脑中自由基的增加会直接导致神经元凋亡和突触丢失。降低体内氧化应激水平是治疗和预防AD的好策略。目前，化学合成的抗氧化剂，如：丁基羟基茴香醚（BHA）和丁基化羟基甲苯（BHT），由于其自身的毒性和副作用，不利于人体健康。因此，研发新的利于人体健康的，且拥有抗氧化和改善记忆的产品尤为重要。

此外，在AD过程中还表现为乙酰胆碱（ACh）的大量丢失，ACh在神经信号的传导中起重要作用。ACh在胆碱乙酰转移酶（ChAT）的催化下由胆碱和乙酰辅酶A合成，并在乙酰胆碱酯酶（AChE）的作用下迅速水解为胆碱和乙酸。在AD过程中，ACh的合成和水解平衡被打破，导致ACh水平显著下降。因此，AChE也成为治疗和预防AD的主要靶点。

核桃（Juglans regia L.）是胡桃科胡桃属植物，与扁桃、腰果、榛子并称为世界著名的“四大干果”。核桃仁中丰富的油脂含量（65.8%）以及多种不饱和脂肪酸，使得核桃可作为植物油的来源之一。核桃仁榨油后，大部分油脂被榨出，余下核桃粕为副产物。核桃粕中含有大量的蛋白质，氨基酸种类齐全，具有抗氧化、提高免疫、改善智力等生物活性，是活性多肽的优良来源。但是大多数核桃粕都被用作饲料或者直接丢弃，不仅造成核桃蛋白资源的浪费，也严重阻碍了核桃产业的发展。

发明内容

为了解决上述问题，本发明以核桃粕为原料，经脱脂后，采用碱提酸沉法提取脱脂核桃粕中的蛋白，再用胰蛋白酶酶解得到核桃多肽酶解产物，使用1 kDa超滤膜超滤后，滤液采用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）鉴定核桃多肽的序列，并利用分子对接技术筛选具备预防阿尔兹海默症多肽功效的片段，针对对接得分最低的多肽进行人工合成并验证其功效。

本发明提供的预防阿尔兹海默症的核桃多肽，其自N端到C端的氨基酸序列为：Glu-Pro-Glu-Val-Leu-Arg，以下简称为EPEVLR。