[发明专利]一种鉴定评价秀珍菇对奈氏西地西菌诱发的黄斑病抗性水平的方法

权利要求书

1.一种利用子实体接种鉴定评价秀珍菇黄斑病抗性水平的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)准备秀珍菇菌棒

栽培料带接种秀珍菇菌种后，进行菌丝培养80天，待菌丝生理成熟后，温差刺激菌棒出菇；

(2)制备病原菌悬浮液

取黄斑病病原菌菌株，置于液体NB培养基中，震荡培养2天，获得病原菌悬浮液；

(3)秀珍菇出菇及病原菌接种

选取子实体多、整齐健康的菌棒，在菌盖大小为0.5-1.0cm时接种；

接种病原菌时采用无菌毛刷蘸取病原菌悬浮液，均匀涂抹在秀珍菇子实体上；

接种病原菌后，将菌棒置于密闭保鲜盒内进行培养；培养过程中保持保鲜盒内高CO₂浓度；

(4)抗病水平评价

培养结束后，取出菌棒，对秀珍菇黄斑病发病情况进行调查，记录每个菌棒发病子实体的数量及发病等级，计算病情指数，并据此判定秀珍菇品种黄斑病抗性水平；

在步骤（4）中，根据每个菌棒上发病子实体及子实体总数量，获得单个菌棒的发病率，计算方法为：

发病率=每个菌棒上发病子实体数量/子实体总数量；

根据发病率对菌棒分别进行分级，分级标准如下：

所述病情指数的计算公式如下：

病情指数=（n₀*0+n₁*1+n₃*3+n₅*5+n₇*7）*100/(N*7)；

其中，N代表菌棒总数量，n代表每个发病等级的菌棒数量，0、1、3、5、7代表病害等级；

根据病情指数对不同品种秀珍菇黄斑病抗性水平进行分类，判定秀珍菇品种黄斑病抗性水平的标准如下：

所述黄斑病病原菌菌株为奈氏西地西菌；

在步骤(2)中，所述震荡培养结束后，菌液离心，收集沉淀获得菌体，所述菌体用无菌水稀释，得到所述病原菌悬浮液；

在步骤(2)中，所述震荡培养的条件为28℃、180rpm/min培养48h；

所述离心为5000rpm/min离心2min；

所述病原菌悬浮液中病原菌数量为1x10⁸个/ml，每个菌棒接种病原菌菌液5ml；

在步骤(3)中，每个品种接种病原菌的菌棒数不少于10个，每个菌棒上的子实体个数不少于20个；

在步骤(3)中，培养时，使所述菌棒在密闭保鲜盒内，距离盒壁2-8cm，出菇面距离盒壁10-20cm；

在步骤(3)中，培养条件为温度25-30℃，湿度85-100％，培养48h。