[发明专利]一种含氮杂环有机化合物中间产物的合成和分析方法

权利要求书

1.一种含氮杂环有机化合物中间产物的合成和分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)样品的预处理：将样品捣碎后，置于50mL玻璃离心管中，然后加入乙腈/二氯甲烷混合溶液，超声后加入无水硫酸钠，高速电动匀浆器均质，旋涡混匀，离心，将乙腈/二氨甲烷层小心转移到100mL鸡心瓶中；再向原离心管中加入乙腈/二氯甲烷混合溶液，重复上述操作1～2次，合并两次提取液，于水浴中减压浓缩至干，再分别加入甲醇和甲酸，涡旋混匀，超声后转移到50mL玻璃离心管中,重复上述操作1～2次，合并至离心管中，再加入正己烷，离心，弃上层正己烷层,重复上述操作1～2次，下层加水稀释，分别用甲醇和超纯水活化处理固相萃取柱，再加入试样稀释液，接着加入水和甲醇淋洗，最后用甲醇洗脱，洗脱液减压浓缩至干，并用流动相定容，经有机相滤膜过滤后进样；

(2)含氮杂环有机化合物中间产物识别：首先利用HPLC-QTOF-MS高效液相色谱飞行时间质谱-质谱联用仪，分析鉴定目标样品中中间产物的产量变化趋势，同时，通过密度泛函理论(DFT)泛函分析母体化合物的电子云密度，预测初步反应可能产生的中间产物，然后再通过HPLC-QTOF-MS二级质谱结构预测中间产物结构，初步确认潜在中间产物的结构和色谱参数；

(3)含氮杂环有机化合物中间产物合成：通过设计的氧化反应体系，产生硫酸根自由基(SO₄·-)、羟基自由基(·OH)、超氧自由基(·O₂-)和单线态氧(¹O₂)，利用活性氧(reactiveoxygen species，ROS)淬灭/捕获实验获得需要的ROS，攻击目标含氮杂环有机化合物母体，定向产生大量目标中间产物；

(4)含氮杂环有机化合物中间产物分离纯化：首先，通过固相萃取技术将降解样品中的中间产物富集浓缩，然后，再通过半制备型高效液相色谱生成一定量的目标中间产物纯品，混合一定的有机溶剂，再通过氮吹将有机溶剂吹脱，获得目标中间产物纯品；

(5)样品纯度检验：采用HPLC-QTOF-MS进行纯度检查，判断色谱峰是否有氯离子、硫酸根离子、重金属等杂峰；通过已知杂峰标准品来定量杂峰的物质含量，即杂质含量，控制的质量标准需要低于1％，才最终判断含氮杂环有机化合物中间产物分离纯化样品符合纯度要求；

(6)含氮杂环有机化合物中间产物标准品定量：使用制备的含氮杂环有机化合物中间产物标准品，可以通过HPLC-MS/MS建立浓度标准曲线，并实现对目标样品中的中间产物、转化产物或副产物的定量分析。

2.根据权利要求1所述的一种含氮杂环有机化合物中间产物的合成和分析方法，其特征在于：步骤(1)样品的预处理方法为，将样品捣碎后称取5～10g；乙腈/二氯甲烷混合溶液体积为25～30mL，乙腈∶二氯甲烷体积比为95～100∶5；接着超声2～3min加入5～10g无水硫酸钠；高速电动匀浆器10000～15000r/min均质1.5～2min；旋涡混匀1～1.5min，3000～4000r/min离心8～10min；再向原离心管中加入25～30mL乙腈/二氯甲烷混合溶液,于50～55℃水浴中减压浓缩至干；再分别加入1～1.5mL甲醇和2～2.5mL1％(体积分数，下同)甲酸，涡旋混匀，超声2～3min，转移到50mL玻璃离心管中，重复上述操作1～2次,合并至离心管中，再加入8～10mL正己烷，3000r/min离心6min，弃上层正己烷层,重复上述操作1～2次，下层加水7mL稀释，分别用4mL甲醇和5mL超纯水活化处理HLB固相萃取柱，再加入试样稀释液，接着加入5mL水和2mL 5％(体积分数)甲醇淋洗,最后用10mL甲醇洗脱，洗脱液于55℃减压浓缩至干，并用1mL流动相(甲醇:0.1％甲酸＝3∶7，体积比)定容，经0.22μm有机相滤膜过滤后进样。