[发明专利]一种细菌活性电化学检测方法

说明书

本发明公开了一种细菌活性电化学检测方法，属于生物检测技术领域，包括以下步骤：细菌复苏、培养；细菌的洗涤、细菌混悬液的制备；细菌混悬液进行检测前处理，前处理所采用的方法为水浴加热；将水浴加热的细菌混悬液离心、吸取上清液；使用电极系统对上清液进行电化学检测。本发明提供的电化学检测方法通过水浴加热促进菌体内电活性物质释放后，运用电化学方法直接进行检测，有效增强了细菌电化学伏安响应，提高了细菌活性检测的敏感度和准确性，具有快速、简便、成本低廉，可连续检测细菌样本的优势，可为使用电化学方法在微生物活性检测方面提供一种新思路。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种细菌活性电化学检测方法。

背景技术

细菌在我们的生活中无处不在，食源性、水源性、动物源性等细菌可极易通过饮食、饮水、接触、空气等途径在个体之间传播，引发感染，严重时可危及生命。食品制造业、制药工业、水质监测、临床诊断、公共卫生等领域均须严格按照相关标准实施细菌活性检测，控制细菌含量。除此外，细菌活性检测可为食品加工、土壤检测、水质监测、医疗诊断技术、环境保护和石油降解等领域的技术更新和机制解释提供依据。随着社会和科学的发展，各领域对细菌活性检测的需求增加，所需检测方法需具有更高的准确度、灵敏度。

传统细菌活性检测方法包括平板计数法、浊度法、流式细胞仪计数法等。平板计数法是最常用的细菌活性检测方法，但该方法劳动强度高、费时耗力，操作繁琐；浊度法无法区分细菌死活状态，影响因素较多；流式细胞仪计数法成本昂贵，需要操作人员拥有较高的专业素养。由此可见传统方法均存在着一定的局限性。近年来，电化学法因其快速、简便、成本低廉、操作简单等特点在微生物检测领域应用甚广，如电流法、阻抗法等。电流法较为快速，但其无法直接检测细菌，需要在检测样品中添加氧化还原酶或适当介质进行间接检测，影响结果因素较多，存在着灵敏度低、选择性差等缺点，且检测时间较长；阻抗法是通过检测培养基电特性变化测定微生物含量，当实验样本组成成分复杂时，该法易受到干扰，导致结果准确性较低，电信号监测性能较差，这些因素阻碍了阻抗法的发展。以细菌悬液中嘌呤为标志物的电化学检测为一种直接电化学检测方法，该法通过检测细菌释放到悬液中嘌呤含量和种类的变化来检测细菌活性，较平板计数法和浊度法简单可靠，但细菌分泌至少2小时后释放的嘌呤含量才可被该法检测出峰信号，耗时长且响应较低。

发明内容

为此，本发明提供一种细菌活性电化学检测方法，以解决现有细菌检测技术中所存在的费时耗力、操作复杂、灵敏度和准确度低的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明提供的一种细菌活性电化学检测方法，包括以下步骤：

一、细菌复苏、培养；

二、细菌的洗涤、细菌混悬液的制备；

三、细菌混悬液进行检测前处理，前处理所采用的方法为水浴加热；

四、将所述水浴加热的细菌混悬液离心、吸取上清液；

五、使用电极系统对所述上清液进行电化学检测。

进一步地，其中，步骤三中，所述细菌混悬液水浴温度为30～80℃，水浴时间为5～50min。

进一步地，所述水浴温度为50～55℃，水浴时间为10～20min。

进一步地，其中，步骤一中，所述细菌包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。

进一步地，步骤二中，洗涤所使用的溶液为pH 6.5～7.5的PBS溶液，洗涤的次数为3～5次。

进一步地，其中，步骤二中，在制备细菌混悬液中，混悬所使用的液体为pH 6.5～7.5的PBS溶液。

进一步地，其中，步骤四中，所述离心转速为4000～8000rpm，离心时间为5～15min。