[发明专利]一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒

说明书

本发明属于试剂盒技术领域，涉及一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒，包括和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂。本发明提供的试剂盒灵敏度高、稳定性好，可用于中风、心力衰竭以及心肌梗死的快速检测，为临床提供了更快的诊断技术。

技术领域

本发明属于试剂盒技术领域，涉及一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒。

背景技术

据统计，我国目前心衰患病率已达1.3％左右，现症患者约1000万，中国已成为世界上拥有最大心衰病患群体的国家。人体在发生中风时，由下丘脑-脑垂体-肾上腺形成的压力轴线会被激活。在发病过程中，脑垂体后叶分泌的后叶加压素与促进肾上腺皮质激素扮演着重要角色。然而，上述两种激素较不稳定，半衰期较短，很难对它们进行准确测量。研究发现，下丘脑分泌的和肽素(copeptin，简称CPP)可以作为一种新的生物标记物，对预测中风发作有重要作用。

和肽素、神经垂体素运载蛋白以及精氨酸加压素/抗利尿激素(argininevasopressin，AVP)共同组成加压素原。和肽素在1972年被科研人员所发现。该蛋白含有39个氨基酸残基的糖肽，是抗利尿激素原的C端部分。精氨酸加压素由下丘脑分泌，在中枢系统可调节脑部组织代谢以及调和颅内压，具有收缩血管、升高血压、加强记忆、参与集体应激反应、参与体温及免疫调节等生理功能。和肽素作为一种与精氨酸加压素同源的蛋白，其分泌量和精氨酸加压素大致相同。

中风患者体内后叶加压素分泌量会体现在血液中的和肽素含量上，因此和肽素可作为一种新的预测中风生物标记物。血液中的和肽素水平越高，患者发生严重中风的几率也越高。另外，和肽素作为一种内源应激标记物，参与机体的应激反应，在急性冠脉综合征发生的最初就有显著升高，有可能成为急性心肌梗死的诊断与排除的标志物之一。同时，和肽素(CPP)可作为心力衰竭的标志物，在体内表达水平与患者心衰的程度密切相关，对指导心衰的诊断和评估预后有重要作用。

相比于后叶加压素和精氨酸加压素，和肽素更稳定更易测量，可以开发出灵敏度，稳定性更好检测试剂盒，用于中风、心力衰竭、心肌梗死等的检测。

现有测定和肽素的方法有放射免疫法、免疫层析法和化学发光法等。放射免疫法存在检测时间长，核元素污染的问题。免疫层析法存在灵敏度较低，线性范围较窄，操作复杂，自动化程度低且受人为因素影响较大的问题。化学发光法灵敏度高，线性范围广，检测结果准确，自动化程度高，无放射性风险及其检测时间短，并且可以对衍生物、抗体类目标物质进行检测，在临床应用中有更有前景。现有化学发光技术，将一株抗体直接包被磁珠上，另一株抗体标记生物素，链霉亲和素标记发光物，并没有实现信号值的放大，检测和肽素的灵敏度还是偏低，为并不能满足心血管疾病需要快速而准确被检测出来需要。因此国内急需一种高灵敏度的化学发光法法检测和肽素的试剂盒，辅助心血管疾病提供快速而准确的临床诊断方案，降低中风、心力衰竭、心肌梗死等病症及有可能导致的各种疾病的发生概率。

发明内容

本发明针对现有化学发光技术存在的问题，提供了一种灵敏度高、稳定性好的和肽素检测方法，可用于中风、心力衰竭以及心肌梗死的快速检测，为临床提供了更快的诊断技术。

本发明的以上目的通过以下技术方案来实现：一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒，包括：

和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂。

作为优选，和肽素抗体包被磁性颗粒试剂中，和肽素抗体包被磁性颗粒的浓度为0.2～1mg/ml；和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂中，和肽素抗体偶联链霉亲和素的浓度为0.1～3μg/ml；生物素偶联的碱性磷酸酶试剂中，生物素偶联的碱性磷酸酶的浓度为0.2～1μg/ml。

作为优选，和肽素抗体包被磁性颗粒试剂的制备方法，包括以下步骤：