[发明专利]一种经皮肤致敏的食物过敏动物模型的建立方法

说明书

本发明公开了一种经皮肤致敏的食物过敏动物模型的建立方法，属于医疗评价、检测技术领域。所述方法包括致敏原致敏阶段和致敏原激发阶段，致敏原致敏阶段使用含有OVA的MC903乙醇溶液涂抹实验动物皮肤，致敏原激发阶段使用溶解在缓冲液中的OVA进行灌胃激发。本发明提供了一种经皮肤致敏的食物过敏动物模型的建立方法，具有操作简便、造模周期短、费用低、重现性好等优点。

技术领域

本发明属于医疗评价、检测技术领域，具体涉及一种经皮肤致敏的食物过敏动物模型的建立方法。

背景技术

食物过敏是指由机体免疫系统对某些食物蛋白质的超常反应，发病时可累及周身多个系统，如皮肤、呼吸道、胃肠道和中枢神经系统，严重时可导致过敏性休克甚至危及生命。近些年来，世界范围内食物过敏的发病率呈逐年上升趋势，食物过敏已经成为全球关注的公共卫生问题，被称为继哮喘之后的“第二波”过敏流行病。大量研究发现，早期皮肤暴露是诱发食物过敏的重要风险因素，据此提出的“双重致敏原暴露假说”，认为经口致敏可以促进免疫耐受的形成，但是经皮肤致敏则会干扰口服耐受。受损的皮肤屏障导致的变应原早期暴露和持续性炎症可能诱发和加剧食物过敏。

准确的食物致敏原评价方法有助于过敏相关免疫机理的研究，也是研发预防和治疗食物过敏手段的必要途径。评价食物致敏原致敏性的方法有体外免疫学方法、模拟胃肠消化模型、细胞模型和动物模型。体内评价是研究食物潜在致敏性最直接、准确的方法。致敏原的体内评价手段多采用龋齿类动物过敏模型。作为生物医学领域最常使用的实验动物，小鼠常被用于构建食物过敏的动物模型，其中近交系的BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠是常见的实验用动物。

目前利用小鼠构建食物过敏的模型多采用灌胃致敏和腹腔注射致敏两种致敏途径。其中灌胃致敏构建的食物过敏模型存在建模周期长、成本高和易产生口服耐受性的缺陷。而腹腔注射并非人体摄入食物致敏原的天然途径，因而不能反应食物进入机体的真实情况。近些年，经皮肤致敏造成的食物过敏的发生率呈逐年上升的趋势。传统的灌胃和腹腔注射致敏构建的模型已经不能很好的模拟当前临床上的致敏发生的过程。

公开号为CN113209082A的专利申请公开了一种食物过敏的小鼠造模方法，具体建立方法是：致敏期每周灌胃鸡蛋清5mg+10μg霍乱毒素，致敏诱导时间：第7、14、21和28天，第35天用20mg鸡蛋清液激发并在激发后30min观察各组小鼠致敏症状。同时设置空白对照组每次每只小鼠灌胃300μL PBS。该方法的致敏动物模型为灌胃致敏方面，不能够很好的模拟当前临床上的一些致敏发生的过程。

所以经皮肤致敏并优良的致敏动物模型的构建是发现过敏机制并研究过敏的又一重要途径和方向。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提出一种小鼠经皮肤致敏的食物过敏模型的建立及其免疫评价，该模型具有致敏显著，相关过敏指标显著的特点。

为了实现上述目的，本发明的实施例在一方面构建了经皮肤致敏的食物过敏模型，并选用了两种不同品种的小鼠，另一方面分析了食物过敏相关指标并对该经皮肤致敏的食物过敏模型进行了评价。

根据本发明实施例的一种小鼠经皮肤致敏的食物过敏模型的建立方法，其构建模型所需试剂为MC903(钙泊三醇水合物)和OVA(鸡蛋卵清蛋白)。其构建的小鼠经皮肤致敏的食物过敏模型具有较高过敏症状评分、较高水平的血清OVA-特异性IgE和较高占比的脾脏Th2亚群。这些结果表明本发明的小鼠经皮肤致敏的食物过敏模型构建成功，并能很好的评价小鼠的食物过敏状态及程度。

本发明提供了一种经皮肤致敏的食物过敏动物模型的建立方法，包括致敏原致敏阶段和致敏原激发阶段，致敏原致敏阶段使用含有OVA的MC903乙醇溶液涂抹实验动物皮肤，致敏原激发阶段使用溶解在缓冲液中的OVA进行灌胃激发。

优选的，其中OVA的浓度为5mg/mL，MC903的浓度为2nmoL。

优选的，所用实验动物为小鼠，小鼠为BALB/c或C57BL/6。