[发明专利]一种病毒RNA保护剂及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种病毒RNA保护剂及其制备方法与应用，属于RNA保护剂制备技术领域。所述病毒RNA保护剂包括以下组分：异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β‑巯基乙醇、聚乙二醇200、曲拉通X‑100和柠檬酸钠。该保护剂可以对采集的体液病毒RNA样本进行良好的保护，尤其在夏季高温(如35℃)下能够在较长时间内保持病毒RNA的完整性，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于RNA保护剂制备技术领域，具体涉及一种病毒RNA保护剂及其制备方法与应用。

背景技术

本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

病毒(Virus)是由一种核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质(Protein)构成的非细胞形态。病毒体积非常微小，结构及其简单，但具有高度的寄生性，完全依赖宿主细胞的能量和代谢系统。根据遗传物质病毒可分为DNA病毒、RNA病毒、蛋白质病毒(如:朊病毒不含核酸，仅有蛋白质构成)。自然界中存在很多RNA病毒，比如猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪水疱疹病毒(SVDV)、SARS病毒、新型冠状病毒(2019-nCoV)等。

高质量、完整性的病毒RNA样本是疾病诊断与防治的重要前提，然而细胞内源性RNA酶和环境中外源性RNA酶的广泛存在使得待测样本中的RNA在存储运、输过程中很容易降解，从而导致检测不到RNA，造成检测结果的“假阴性”。尤其是在夏季高温下，待测病毒RNA样品一旦从生物体中分离很快降解。因此，如何在运输和储存过程中保护病毒样本RNA不降解，成为样本采集后重点关注的问题。

常规条件下，取样后立刻将样品进行液氮保存才能确保RNA结构的完整性，用于下一步实验研究。然而，在实际采样操作中，尤其是流行病学大规模调查时，样本的采集并不是在实验室中进行，很难做到所有样品即刻全部能够液氮保存。因此，提供一种室温甚至夏季高温下保存RNA病毒的保护剂，至关重要。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明的目的在于提供及一种病毒RNA保护剂及其制备方法与应用。该保护剂可以对采集的体液病毒RNA样本进行良好的保护，尤其在夏季高温环境下能够在较长时间内保持病毒RNA的完整性，因此具有良好的实际应用之价值。

本发明的第一个方面，提供病毒RNA保护剂，包括以下组分：异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇、聚乙二醇200(PEG 200)、曲拉通100(Triton X-100)和柠檬酸钠。

病毒RNA保护剂的pH值为7-8；进一步的，病毒RNA保护剂的pH值为7.5。

异硫氰酸胍和β-巯基乙醇共同作用可以抑制RNase的活性。

异硫氰酸胍和十二烷基肌氨酸钠共同作用可以使蛋白质变性，释放RNA。

柠檬酸钠：它可以控制反应体系的离子强度，同时还有一定的缓冲作用，保证体系PH的相对稳定状态；另外在采集血液样本时还可以防止血液凝固。

聚乙二醇200作为粘度调节剂，可以降低离心剪切力对RNA造成的破坏，保证RNA的完整性。同时具有沉淀病毒颗粒剂、沉淀核酸的作用，还可以抑制微生物的生长。

曲拉通X-100是一种非离子型表面活性剂，即可以溶解细胞膜蛋白有利于蛋白质与RNA的分离，还可以很好地对核酸特别是单链的RNA起到保护作用。

上述保护剂各组成成分协同配合，从而使得最终制备得到的病毒RNA保护剂对RNA样本具有良好的保护作用，特别是适于在高温天气下(35℃及以上)使用，能够有效防止病毒RNA样本的降解。

本发明的第二个方面，提供病毒RNA保护剂的制备方法，所述制备方法包括：