[发明专利]一种PD1抗体与CCL7融合蛋白及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种PD1抗体与CCL7融合蛋白及其制备方法与应用，所述PD1与CCL7融合蛋白为PD‑1抗体蛋白和趋化因子CCL7蛋白融合后的蛋白；其中，所述PD‑1抗体蛋白为PD‑1的单链抗体；编码所述趋化因子CCL7的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述PD‑1抗体蛋白和所述趋化因子CCL7之间采用接头连接。本发明将CCL7融合到PD1抗体上，各组分可发挥协同作用，使融合蛋白的生物学活性较各单体大大增强，具体地，CCL7可以募集活化T细胞到肿瘤区域，从而打破之前的局限，也进一步加强PD1抗体的抗肿瘤免疫。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种PD1抗体与CCL7融合蛋白及其制备方法与在制备用于预防、诊断和治疗肿瘤产品中的应用。

背景技术

癌症是严重影响人类健康的疾病，也是人类死亡的主要原因。肺癌是发病率和死亡率增长最快，多年高居各种癌症的榜首，已成为对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。吸烟、长期暴露于污染的空气中与所在工作场所暴露于致癌原是患肺癌风险增加的主要原因。基于肺癌的生物学特征、治疗和预后，世界卫生组织(WHO)将其分为两大类：非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。NSCLC占所有肺癌病例的85％以上，主要包括腺癌和鳞癌。

在研究肿瘤发生机制与肿瘤微环境方法中，常常使用动物模型来模拟肿瘤在机体内的生长状况。其中由带Cre重组酶的腺病毒(以下简称Ade-Cre)诱导的Krasfl/+Trp53fl/fl(以下简称KP)小鼠模型是研究非小细胞肺癌的主要经典模型之一。正常kras基因可以抑制肿瘤细胞生长，一旦发生突变，例如第十二位甘氨酸(G)突变为天冬氨酸(D)，会持续刺激细胞生长。Trp53是研究最为广泛的也是最重要的肿瘤抑制基因，p53缺失突变也会导致肿瘤的发生。Kras与Trp53突变常见于非小细胞肺癌中，在小鼠模型中，将Kras突变和p53缺失是理想的非小细胞肺腺癌的研究模型。但由于Kras与Trp53在小鼠生长发育早期发挥重要作用，突变或者缺失都会致死，固需要使用借助Cre-Loxp系统的条件性敲除小鼠来实现在小鼠肺部原发癌的发生。

PD-1是一种重要的免疫抑制分子，是一个268氨基酸残基的膜蛋白，表达于活化T细胞。在机体免疫系统通过免疫杀伤肿瘤时，活化T细胞通过抗原呈递至肿瘤生长部位，但由于肿瘤细胞表面表达PD-L1分子，能与PD-1结合，抑制T细胞的杀伤功能，达到免疫逃逸。目前对于肿瘤的免疫疗法中，大多使用PD-1抗体结合封闭PD-1，来保证T细胞活性，达到杀伤肿瘤细胞的目的。但是该疗法也面临着诸多局限与挑战，效率偏低和复发率高是主要的问题。其中有关如何募集活化T细胞到肿瘤区域的使用方法也是该疗法的局限。

因此，如何开发一种用于预防、诊断和治疗肿瘤产品，能够募集活化T细胞到肿瘤区域，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

为了解决所述技术问题，本发明提供了一种PD1抗体与CCL7融合蛋白及其制备方法与在制备用于预防、诊断和治疗肿瘤产品中的应用，将CCL7融合到PD1抗体上，可以募集活化T细胞到肿瘤区域，从而打破之前的局限，也进一步加强PD1抗体的抗肿瘤免疫。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

在本发明的第一方面，提供了一种PD1抗体与CCL7融合蛋白，所述PD1抗体与CCL7融合蛋白为抗PD-1抗体蛋白和趋化因子CCL7蛋白融合后的蛋白；其中，

所述PD-1抗体蛋白包括PD-1的单链抗体或PD-1的单克隆抗体；

编码所述趋化因子CCL7的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，

所述PD-1抗体蛋白和所述趋化因子CCL7之间采用第一接头蛋白连接。

进一步地，编码所述第一接头蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。