[发明专利]一种以秸秆发酵产球毛壳菌孢子液的方法及应用

说明书

本发明公开了一种以秸秆发酵产球毛壳菌菌剂的方法，过程包括：将秸秆、麸皮、玉米粉按照20％、44％、36％的质量配比混合成混合料，制备发酵培养基；将球毛壳菌菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，25℃培养15d，然后挑取菌落接种到所述发酵培养基上，25‑28℃培养21d，得发酵料；将所述发酵料进行水洗分离，得球毛壳菌孢子液；按照体积比3:1的比例将所述球毛壳菌孢子液分散至羧甲基纤维素钠溶液中，得球毛壳菌菌剂。本发明控制了发酵温度、原料配比和发酵时间，得到的菌剂中活菌数较多，可显著促进植物的生长。

技术领域

本发明涉及球毛壳菌发酵技术领域，更具体地说是涉及一种以秸秆发酵产球毛壳菌孢子液的方法及应用。

背景技术

在杀菌剂的研发中，从植物或微生物中提取具有抗病原菌活性的天然物质发挥着重要的潜力作用。植物体中的内生真菌，作为一种新的微生物资源及其产生的天然活性物质，已经得到了越来越多的关注。

球毛壳菌是毛壳属中的重要菌群，属于子囊菌亚门(Aseomyeotina)、核菌纲(Pyrenomyeetes)、球壳目(Sphaeriales)、黑孢壳科(Melanosporaceae)、毛壳菌属(Chaetomium spp.)，是常见的植物内生真菌，广泛分布于空气、土壤等多种自然环境中，对多种植物病害具有潜在的生物防治作用。生防菌规模化生产的基础是发酵工艺的优化，而发酵工艺的基本目标是降低成本，简化工艺流程，获得最大产孢量或次生代谢物。目前尚未有通过秸秆对球毛壳菌进行发酵的具体配方及配比的报道，其对植物的促生作用有待进一步的推广和应用。

因此，如何提供一种以秸秆发酵产球毛壳菌孢子液的方法，并将其进一步应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种以秸秆发酵产球毛壳菌菌剂的方法，控制了发酵温度、原料配比和发酵时间，得到的菌剂中活菌数较多，可显著促进植物的生长。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种以秸秆发酵产球毛壳菌菌剂的方法，包括下述过程：

1)制备发酵培养基：将秸秆、麸皮、玉米粉按照20％、44％、36％的质量配比混合成混合料，制备发酵培养基；

2)菌株培养：将球毛壳菌菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，25℃培养15d，然后挑取菌落接种到所述发酵培养基上，25-28℃培养21d，得发酵料；

3)水洗分离：将所述发酵料进行水洗分离，得球毛壳菌孢子液；

4)制备菌剂：按照体积比3:1的比例将所述球毛壳菌孢子液分散至羧甲基纤维素钠溶液中，得球毛壳菌菌剂。

作为相同的发明构思，以秸秆发酵产球毛壳菌菌剂的方法，还可以为：

步骤1)中，将制备发酵培养基的过程替换为：将秸秆、玉米粉按照30％、70％的质量配比混合，制备发酵培养基。

作为上述技术方案优选的技术方案，步骤1)中，所述秸秆的长度为2cm，且用水浸泡12h；所述发酵为向混合料中加水，加水量为0.5mL/g，搅拌均匀，装入发酵袋灭菌1h，放置1-2d，再次灭菌30min，制成所需的发酵培养基。

作为上述技术方案优选的技术方案，步骤2)中，所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基的原料包括：去皮马铃薯300g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000ml。

作为上述技术方案优选的技术方案，步骤3)中，球毛壳菌孢子液中孢子数为1.4×10⁸个/g或9×10⁷个/g。

作为上述技术方案优选的技术方案，步骤4)中，所述羧甲基纤维素钠溶液的质量分数为4％。

作为上述技术方案优选的技术方案，所述球毛壳菌菌株为球毛壳菌12XP1-2-3。