[发明专利]鉴定西洋参和人参的分子标记、引物、方法及试剂盒

说明书

本发明公开了鉴定人参和西洋参的分子标记，分子标记序列如SEQ ID NO.1所示；分子标记应用于鉴别人参和西洋参中；具体为：基于该分子标记中人参DNA存在的一段特异性插入序列，在特异性插入序列的两侧分别设计1条正向引物和1条反向引物，并以该引物对待检测产品进行PCR。引物序列SEQ ID NO.2～SEQ ID NO.3所示；将该引物应用于鉴定人参和西洋参中，过程为：提取待测样品的基因组；以引物对基因组DNA进行PCR扩增，然后对PCR扩增产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳检测，通过观察扩增条带大小为575bp，则待测样品为人参；若扩增条带大小为210bp，则待测样品为西洋参。

技术领域

本发明涉及中药材品种鉴定技术领域，更具体地说是涉及一种鉴定西洋参和人参的分子标记、引物、方法及试剂盒。

背景技术

人参和西洋参均为五加科多年生草本植物，在我国具有悠久的应用历史，是人参属中应用最广泛的两种中药材。虽然人参和西洋参外观相似，且人参皂苷是它们最主要的生物活性成分，但由于皂苷种类和含量的不同，两者具有不同的性质和药用价值。人参微温，味甘微苦，有大补元气、安神生津、补脾益肺的功效。西洋参性凉，味甘微苦，有补肺清火、补气养阴、安神的功效。人参和西洋参的药性和功效不同，二者不能混淆使用，但是由于人参和西洋参的性状相似，市场上将二者混淆的现象时有发生。因此，准确鉴别商品人参类药材的来源对保障公众健康和消费者的利益具有至关重要的作用。

近年来，对于人参与西洋参的鉴别开发了一系列的DNA分子标记技术，如DNA条形码，多重位点特异性PCR等。利用DNA条形码鉴别时，每次均需要对待测样品进行条形码的扩增、测序和聚类分析；多重位点特异性PCR则是利用人参和西洋参的多个SNP位点设特异性引物，从而利用多种引物的组合对二者进行多重PCR鉴别。但物种特异性引物需额外引入错配碱基，并且需要对PCR反应体系的温度和引物浓度进行优化才能保证鉴别结果的可靠性。此外，多重PCR需要两对或两对以上的引物来扩增不同的目标基因片段，但引物数量过多容易产生非特异性产物，会引起目标基因扩增效率的降低，进而可能影响鉴定结果的准确性。

因此，如何筛选一种可以准确鉴别人参和西洋参的分子标记，并提供一种可以准确鉴别人参和西洋参的简单PCR方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种鉴定西洋参和人参的分子标记、引物、方法及试剂盒，基于人参和西洋参细胞色素P450基因序列的不同，开发分子标记，并设计引物建立了鉴定人参和西洋参的简单PCR技术，检测方法简单、准确。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种鉴定人参和西洋参的分子标记，所述分子标记序列如SEQ ID NO.1所示；所述分子标记应用于鉴别人参和西洋参中；具体为：基于该分子标记设计1条正向引物和1条反向引物，并以该引物对待检测产品进行PCR。

西洋参的细胞色素P450基因序列如SEQ ID No.4所示，人参的细胞色素P450基因序列如SEQ ID No.5所示；人参的细胞色素P450基因序列与西洋参相比，存在一段长度为365bp的插入序列(SEQ ID No.1所示)；以该序列作为人参的分子标记，并基于该序列设计引物，可以特异性对人参进行扩增，进而鉴定人参和西洋参。

作为上述技术方案优选的技术方案，所述特异性引物序列：

F：5’-CTTTCTTGGGTAGATCGTAT-3’，如SEQ ID NO.2所示；

R：5’-GCCAGTAATGCTTGTGCTT-3’，如SEQ ID NO.3所示。

作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种鉴定人参和西洋参的引物，所述引物序列如SEQ ID NO.2～SEQ ID NO.3所示。