[发明专利]一种具有抑菌效果的溶菌酶组合物

说明书

本发明涉及一种具有抑菌效果的溶菌酶组合物，其中的活性成分为柠檬醛修饰得到的溶菌酶衍生物。本发明的溶菌酶衍生物具有优异的抑菌性能，其抑菌效果和抑菌谱广度均优于常见的普通溶菌酶。本发明的溶菌酶来源天然，无毒副作用，且溶菌酶组合物制备方法可工业化，具有推广应用价值。

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及一种溶菌酶组合物。

背景技术

溶菌酶也称为细胞壁溶解酶，是一种可以使细胞壁水解稳定碱性蛋白水解酶。它主要作用于细菌细胞壁，即作用于其肽聚糖中的N-乙酰葡萄糖胺及N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键，通过对其进行水解促进细菌细胞壁中的多糖分解成糖肽，降低细菌细胞壁稳定性，破坏其结构，最后导致细胞壁裂解细胞中的内容物流出胞外，致使细菌溶解。

溶菌酶作为单核、中性粒细胞和巨噬细胞产物，对革兰氏阳性菌有着很显著抗菌性。此外，溶菌酶是一种存在于生物体内的碱性蛋白酶，其也是一种非特异性免疫因子，在抑制和杀死病原体时一般不会有抗药性的情况发生。溶菌酶的这种与抗生素不同的抑菌机制己经得到重视，并应用于食品及药品当中。

最初研究普遍认为溶菌酶的杀菌性依赖于酶解活性。随着研究的深入，发现当采用一定的方式使溶菌酶酶活丧失，其杀菌性仍然存在。通过前期大量的试验分析，得出溶菌酶的可能杀菌模式：根据作用细菌种类和方式不同溶菌酶会采取溶菌模式与非溶菌模式。这两种模式首先都要由带正电的溶菌酶与带负电细菌接触产生静电吸引，随后一种可能是溶菌酶依赖酶活性水解肽聚糖层，或者不依赖酶活性通过溶菌酶某未知特定区域与细菌细胞壁上磷酸基团成键或替换细胞壁上的阳离子引起细菌溶解死亡；还有可能就是溶菌酶与细菌作用后破坏细菌膜功能引起细菌死亡，前两种为溶菌死亡，后者为细菌非溶解死亡。

溶菌酶在自然界中大量存在且杀菌效果显著，但它是非广谱抗菌剂，为了拓展溶菌酶的抗菌谱和使用范围，国内外学者进行了溶菌酶修饰研究，但衍生化后的溶菌酶抗菌谱仍有限。

柠檬醛(3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醛)是一种单萜化合物，分子式为C₁₀H₁₆O，无色或淡黄色透明液体。天然柠檬醛主要存在于山苍子油、柠檬草油、马鞭草油、垂叶香茅油等植物精油中。在我国，富含天然柠檬醛的植物资源丰富，其中山苍子植物精油中柠檬醛含量达65％-80％。柠檬醛具有浓郁的柠檬样香气，通常作为调味剂、防腐剂和芳香剂用在食品和化妆品中，也是合成维生素A、紫罗兰酮、甲基紫罗兰酮的主要原料。相关文献资料表明，柠檬醛还具有杀虫驱避、抑菌抗菌和抗氧化等生物活性，同时柠檬醛具有治疗心血管疾病和抗白血病等功效。近年又发现柠檬醛有较强的平喘镇咳、抗过敏等作用。

目前，溶菌酶衍生物的杀菌效果和抗菌使用范围均有限，亟需一种具有良好杀菌作用、广谱抗菌的溶菌酶组合物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有显著抑菌作用，抗菌谱广，毒副作用小的溶菌酶组合物。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是，提供一种具有抑菌效果的溶菌酶衍生物，其制备方法如下：

(1)将适量柠檬醛溶于己烷中，配制成柠檬醛溶液；

(2)将适量溶菌酶溶于pH 7.4的磷酸钾缓冲液中，配制成溶菌酶溶液；

(3)将步骤(1)中的柠檬醛溶液缓慢滴加至步骤(2)的溶菌酶溶液中，再将等体积含硼氢化钠的pH 7.0磷酸钾缓冲液加入到上述反应混合物中，在0℃缓慢搅拌0.5-2h；

(4)加入反应溶液1-3倍体积的饱和硫酸钠溶液沉淀溶菌酶，高速离心，将离心后的沉淀物重新分散至蒸馏水中；

(5)将步骤(4)的分散物溶液装入透析袋中透析，定期更换透析袋外的蒸馏水，透析后将透析袋中的溶液冷冻干燥，即得溶菌酶衍生物。