[发明专利]一种硫酸软骨素去除蛋白的生产工艺

说明书

本发明提供一种硫酸软骨素去除蛋白的生产工艺，包括以下步骤：(1)蒸煮，(2)提取，(3)一次酶解，(4)过滤浓缩，(5)二次酶解，(6)超滤，(7)沉淀干燥。本发明提供的一种硫酸软骨素去除蛋白的生产工艺，工艺流程简单，使用两次酶解，一次酶解对动物软骨中的硫酸软骨素的蛋白等其他杂质进行粗分解，去除的硫酸软骨素中大量蛋白，然后在经过二次酶解对利用蛋白水解酶对硫酸软骨素的蛋白进行更深层次的水解去除，一次酶解后对滤液进行浓缩后在进行二次酶解，得到更高纯度的硫酸软骨素产品的同时，大大降低了用酶量。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种硫酸软骨素去除蛋白的生产工艺。

背景技术

硫酸软骨素是广泛存在于动物软骨组织中的一类黏多糖，其基本单位是D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖硫酸酯。硫酸软骨素一般含有50-70个双糖基本结构，分子量约为10-50kDa。它作为结缔组织的重要组成部分，具有多种药理作用与生理功能。在我国硫酸软骨素用于治疗神经痛、神经性偏头痛、关节炎、肩关节痛和腹腔手术后疼痛等，预防和治疗链霉素引起的听觉障碍及各种噪声引起的听觉困难、耳鸣症等，效果显著。在西方发达国家，硫酸软骨素作为保健品长期应用于防治冠心病、心绞痛、心肌梗塞、冠状动脉机能不全、心肌缺血等疾病，无明显的毒副作用，能显著降低冠心病患者的发病率和死亡率。长期的临床应用发现，在动脉和静脉壁上沉积的脂肪等脂质可以被有效去除或减少，能显著降低血浆胆固醇，从而防止动脉粥样硬化的形成。

目前国内及国际上通常所用的生产工艺，在提取过程中，通过生物活性酶，酶解超滤膜拦截或大孔树脂吸附交换所得，得到含硫酸软骨素的料液，通过乙醇沉淀得到硫酸软骨素产品，这种工艺得到的硫酸软骨素含量不高，制备得到的硫酸软骨素中含的大量的分子链蛋白，蛋白在硫酸软骨素产品中含量多，对于腹腔肌肉注射有不好的反应，引起人体体温异常升高，即医学上所说的热原，注入人体的注射剂中含有热原量达1μg/kg就可引起不良反应，可使人体产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃以上，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。该现象称为“热原反应”，因此需要对硫酸软骨素中的蛋白进行去除是十分有必要的。

中国专利CN113234181A公开了一种硫酸软骨素的制备方法采用连续二级酶解法充分水解蛋白质来提高硫酸软骨素的纯度。但是由于是两次酶解之间未对反应溶液进行浓缩，使得生产过程中的二级酶解的用酶量较大，酶解效果差。

中国专利CN111533826A公开了一种从猪骨中同时提取硫酸软骨素和骨胶原蛋白肽的方法，将酶解分成两次，第一次酶解利用碱性蛋白酶和胰蛋白酶的组合在较高pH条件下进行，第二次酶解利用角蛋白酶、菠萝蛋白酶和中性蛋白酶在较低pH条件下进行，可实现对骨胶原蛋白的更充分降解，获得小肽产品。但是同样在两次酶解之间未对反应液进行浓缩，从而导致第二次酶解的用酶量大的问题。

发明内容

本发明为了解决现有技术中的问题，有效的去除硫酸软骨素中的蛋白，用酶量少，降低了成本，适合工业化生产，为了实现上述目的，本发明提供了一种硫酸软骨素去除蛋白的生产工艺，包括以下步骤：(1)蒸煮，(2)提取，(3)一次酶解，(4)过滤浓缩，(5)二次酶解，(6)超滤，(7)沉淀干燥。

作为本发明的进一步优选方案，步骤(1)-(7)具体为：

(1)蒸煮：取动物软骨放在反应釜内，加入清水，蒸煮2-5小时；

(2)提取：将蒸煮后的物料降温至30-50℃，加入碱调节物料的pH值为12-14，碱解1-5小时；

(3)一次酶解：向步骤(2)的物料中加入酸调节物料的pH值为9.5-10，加入碱性蛋白酶或胰酶，搅拌6-7小时，加入酸调节物料的pH值为6-7，升温至60-70℃，静置1-2小时；

(4)过滤浓缩：将步骤(3)酶解后的物料将固体过滤后进行浓缩，得到浓缩液，浓缩方式采用离子吸附或超滤；