[发明专利]一种盐穗木金属硫蛋白HcMT复合物及其在防晒霜中的应用

权利要求书

1.一种防晒霜中应用的Zn-盐穗木金属硫蛋白HcMT复合物，其特征在于，该复合物包括Zn-盐穗木金属硫蛋白HcMT和TiO₂纳米颗粒，Zn-盐穗木金属硫蛋白HcMT复合物具体采用如下步骤制备：

(1)通过SDS-PAGE鉴定表达的融合蛋白，将表达载体pET-32a-HcMT，转化感受态细胞BL21中，筛选阳性单克隆，将阳性单克隆接种于10mL的LB培养基中，于37℃，220rpm摇床中培养8～12h，再按体积比1：100接入500mL培养基中，37℃，220rpm摇床培养4h，直到菌液浓度OD600达到0.6-0.8时，加入终浓度为0.6mM的诱导剂IPTG和终浓度为200μM的ZnSO₄溶液，继续培养6h，12000rpm离心1min收集诱导后的菌体，加入蛋白Loading buffer，沸水浴15min，冰浴2min，15％SDS-PAGE检测蛋白表达情况；

(2)将步骤(1)诱导后的菌液经6000rpm离心15min后去上清，用一定量pH＝8.0浓度为50mM的Tris-HCl重悬三次，最后一次重悬彻底混匀定容至30mL，超声破碎至重悬液成淡黄澄清液体，6000rpm离心15min，保留上清液，采用镍柱对上清液进行纯化；

(3)将20～60mL Zn-HcMT溶液加入到140～180mL浓度为0.5-1.5mM的TiO₂溶液中，于4℃冰箱中用磁力搅拌器搅拌12-36h，将TiO₂-Zn-HcMT溶液置于冷冻干燥仪进行24-48h的冷冻干燥，得到TiO₂-Zn-HcMT复合物粉末。

2.如权利要求1所述的一种在防晒霜中应用的Zn-盐穗木金属硫蛋白HcMT复合物，其特征在于，所述盐穗木金属硫蛋白HcMT的纯化中，镍柱在使用前先用10倍柱床体积，pH＝8浓度为10mM的咪唑溶液洗涤两次，将上清液加入镍柱，低温低转速结合洗涤1.5h，收集流穿液，置于4℃冰箱，在低温下用10倍柱床体积的5mM(pH＝8)咪唑洗涤两次，每次8min，或者用pH＝8浓度为10mM的咪唑溶液、pH＝8浓度为100mM的咪唑溶液、pH＝8浓度为200mM的咪唑溶液、pH＝8浓度为500mM的咪唑溶液各洗涤一次，收集每一次的洗脱液，每次取60μL洗脱液加入10μL Loading buffer，沸水浴15min，冰浴2min，15％SDS-PAGE检测纯化情况。

3.如权利要求1所述的一种在防晒霜中应用的Zn-盐穗木金属硫蛋白HcMT复合物，其特征在于，所述步骤(3)中，40mL Zn-HcMT溶液加入到160mL的浓度为1.0mM的TiO₂溶液，磁力搅拌时间为24h，冷冻干燥时间为36h。

4.如权利要求1所述的在防晒霜中应用的Zn-盐穗木金属硫蛋白HcMT复合物的应用。