[发明专利]一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法在审
| 申请号： | 202111342228.5 | 申请日： | 2021-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN114058588A | 公开（公告）日： | 2022-02-18 |
| 发明（设计）人： | 钟芸诗;程亦榕;时强;陈章涵;徐小雅;周平红;李冰 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属中山医院 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;C12N5/071 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明伟 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人源性肠 腺瘤 器官 制备 方法 | ||
1.一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)获取人肠腺瘤组织；
(2)使用双抗-PBS清洗人肠腺瘤组织4-5次；
(3)切碎组织，使用消化液消化，至组织尺寸小于1mm*1mm；
(4)过滤纤维组织，进一步使用移液枪打散组织，并离心；
(5)弃上清，离心；
(6)弃上清后，使用PBS重悬组织，离心；
(7)弃上清后加入基质胶，基质胶的加入量与初始人肠腺瘤组织大小的比例关系为：每0.3cm*0.5cm*0.5cm大小的初始人肠腺瘤组织加入1000μl-1200μl的基质胶，所述基质胶货号为Corning 356231，重悬组织，加入孔板中；
(8)待基质胶凝固后，加入培养基和Y27632，于培养箱中培养。
2.根据权利要求1所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，获取的人肠腺瘤组织保存在4℃预冷的保存液中，所述保存液购于上海诺典生物技术有限公司，货号为ND-2001-PS 100mL。
3.根据权利要求1所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，双抗-PBS溶液为每500mlPBS溶液中加入5ml双抗得到的混合溶液，所述双抗购于武汉赛维尔生物科技有限公司，货号G4003-100ML，成分为青霉素-链霉素混合液，PBS购于武汉赛维尔生物科技有限公司，货号G4202-500ML，为磷酸盐缓冲液；
步骤(2)中，使用双抗-PBS清洗人肠腺瘤组织每次5-10min。
4.根据权利要求1所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，消化液购于上海诺典生物技术有限公司，货号为ND-3001-DS 100ML。
5.根据权利要求1所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，若可见红色，则使用红细胞裂解液重悬组织，静置待红色消失后，再进行离心。
6.根据权利要求5所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，红细胞裂解液购于天津灏洋华科生物科技有限公司，货号NH4CL2009。
7.根据权利要求1所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，离心处理的条件为：500g离心5min，步骤(6)中，离心处理的次数为两次。
8.根据权利要求1所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，24孔板中一孔加入75ul基质胶类器官悬浊液。
9.根据权利要求1所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(8)中，每孔加入500ul培养基以及10μmol浓度为10uM的Y27632。
10.根据权利要求1所述的一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，其特征在于，步骤(8)中，加入的培养基购于上海诺典生物技术有限公司，货号为ND-1007-CM 100ML，加入的Y27632型号为Tocris 1254/10。
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