[发明专利]一种HCY检测用还原试剂、试剂盒及其使用方法

说明书

本申请涉及体外诊断检测领域，具体公开了一种HCY检测用还原试剂，试剂盒及其使用方法。本申请的一种HCY检测用还原试剂包括Tris‑HCl缓冲液、NaCl和Proclin300和还原试剂，还原试剂包括EDTA、维生素E、三（2‑甲酰乙基）膦盐酸盐和愈创木酚。本申请的还原剂组合的使用，确保与蛋白质通过二硫键结合的氧化型HCY还原为还原型HCY，便于后续的检测准确性，使得后续检测的假阳性率较低的优点。

技术领域

本申请涉及体外诊断检测领域，更具体地说，它涉及一种HCY检测用还原试剂，试剂盒及其使用方法。

背景技术

同型半胱氨酸(Homocysteine，HCY)又称高半胱氨酸，是甲硫氨酸脱甲基后的分解代谢产物，血浆中的HCY浓度异常，可反映机体甲基化状态和转硫化的异常状态，是许多慢性疾病发生的独立危险因素或重要危险因素。目前，临床市场上最常用的HCY检测试剂盒多为采用生化循环酶法的国产试剂盒、采用化学发光法的进口试剂盒。

生化循环酶法试剂成本较低、检测方便，但其检测存在有受胆红素、血红蛋白等血液成分干扰的问题；大型全自动化学发光法检测准确、检测时间短，但进口试剂成本较高、尚存在外贸等政策风险；除了受上述因素影响外，HCY样本检测结果还受蛋白质结合状态的HCY解离情况的影响，对于通过二硫键与蛋白质结合的氧化型HCY，临床检验上通常采用巯基乙醇或二硫苏糖醇进行还原处理，将氧化型HCY还原为还原型HCY，但由于巯基乙醇还原性较差，因此易被空气中的氧气氧化失活，虽然二硫苏糖醇的还原性和稳定性均优于巯基乙醇，但其还原稳定性仍不高，导致最终检测HCY含量的准确性较低，检测结果的假阳性率较高。

发明内容

为了进一步提高HCY检测时相关试剂的还原稳定性，提出了一种HCY检测用还原试剂，为了进一步提高HCY检测试剂盒的检测准确性，从而降低假阳性率，本申请提供一种试剂盒及其使用方法。

第一方面，本申请提供的一种HCY检测用还原试剂，采用如下的技术方案：

一种HCY检测用还原试剂，包括Tris-HCl缓冲液、NaCl和Proclin300，其特征在于，所述还原试剂还包括EDTA、维生素E、三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐和愈创木酚。

通过采用上述技术方案，本申请采用比传统巯基乙醇或二硫苏糖醇还原能力更强、稳定性更好的还原剂组合维生素E、三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐与愈创木酚，确保与蛋白质通过二硫键结合的氧化型HCY还原为还原型HCY，便于后续的检测准确性，使得后续检测的假阳性率较低。

在配方中加入EDTA，EDTA可以螯合溶液中的金属离子，避免还原型HCY的游离巯基重新被氧化形成二硫键，延长了HCY检测试剂的有效期。

且本申请的HCY检测试剂盒，操作简便、即时检测、灵敏度高、特异性好、稳定性好，解决了目前临床上氧化型HCY的还原效果随时间延长而变差，导致HCY生化试剂检测准确性低、假阳性率高的问题，以及进口发光试剂费用昂贵的问题。

本申请的HCY检测试剂盒，还可以联合其他心血管标志物MPO、Lp-PLA2、CRP等，对于急性冠脉综合症患者心脏意外事件的早期预警、早发现早治疗具有重要的意义。

可选的，所述维生素E的重量与Tris-HCl缓冲液的体积比为0.5％-5％。

通过采用上述技术方案，适量的维生素E可以与三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐、愈创木酚起到较好的协配效果，将蛋白质结合状态的氧化型HCY还原为还原型HCY时，还原稳定性较好。

可选的，所述三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐的摩尔浓度为1-10mM。

通过采用上述技术方案，适量的三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐可以与维生素E、愈创木酚起到较好的协配效果，则蛋白质结合状态的氧化型HCY被还原为还原型HCY的还原性较好。

可选的，所述愈创木酚的摩尔浓度0.01-0.1mM。