[发明专利]一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法

说明书

本发明涉及一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法，属于兽医生物学技术领域。本发明所述的鸡滑液囊支原体培养基由基础培养基和辅助培养基组成，其中：基础培养基主要成分有Hank′s浓缩液、乳蛋白水解物、酵母提取物、牛心浸粉、海藻糖，可以通过高压蒸汽灭菌方式除菌；辅助培养基由精氨酸、丙酮酸钠、辅酶Ι、青霉素和猪血清组成，辅助培养基各成分过滤除菌。本发明培养基培养的鸡滑液囊支原体滴度达10¹⁰～10¹¹CCU/ml，培养时间14～24h，猪血清含量低至5％，大大降低了异源体对鸡的应激反应和企业生产成本。用该培养基培养的鸡滑液囊支原体制备的灭活疫苗，其安全性和免疫原性均良好。

技术领域

本发明涉及兽医生物学技术领域，具体涉及一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法。

背景技术

对家禽具有致病性的支原体种类多达28种，其中危害最为严重的是鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)和火鸡支原体。鸡滑液囊支原体可感染鸡与火鸡，可引起关节炎、滑膜炎、气囊炎、鸡蛋尖端综合征等，是造成全球养鸡行业经济损失的主要原因之一。2010年我国广西省和广东省最先发现此病，之后逐渐扩散到全国各地。养殖厂治疗鸡滑液囊支原体引起的相关疾病的方法主要是药物治疗，但是药物治疗容易使鸡滑液囊支原体产生耐药性。随着抗生素使用的限制，疫苗免疫将会成为主要的防控手段。

鸡滑液囊支原体活疫苗、灭活疫苗的有效性，主要是依靠鸡滑液囊支原体的培养滴度和良好的免疫原性。目前分离与培养鸡滑液囊支原体的培养基主要是改良Frey氏培养基，培养滴度在1.0×10⁸～1.0×10⁹CCU/ml，血清含量10％，培养时间24～48h。用该培养基进行禽支原体分离时，生长缓慢，分离时间长，且分离率低。另外，血清含量高不仅增加疫苗的生产成本，而且增加了异源体对鸡的应激反应。为了获得高滴度、高免疫原性的鸡滑液囊支原体，有必要研发一种高效、低成本的培养基。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种培养滴度高、免疫原性好、生产成本低的鸡滑液囊支原体高效液体培养基和固体培养基。本发明的目的之二在于提供一种鸡滑液囊支原体培养基的制备方法。本发明培养基培养的鸡滑液囊支原体滴度达10¹⁰～10¹¹CCU/ml，培养时间14～24h，猪血清含量低至5％。培养时间缩短可以减少老龄菌代谢产生的有害物质，并且减少生产耗能；猪血清含量的降低减少了异源物质对鸡的应激反应，提高了疫苗的安全性，同时也大大降低了企业生产成本。用该培养基培养的鸡滑液囊支原体制备的灭活疫苗，其安全性和免疫原性均良好。

本发明一方面提供了一种鸡滑液囊支原体培养基，由基础培养基和辅助培养基组成，其中：基础培养基主要成分有Hank′s浓缩液、乳蛋白水解物、酵母提取物、牛心浸粉、海藻糖，可以通过高压蒸汽灭菌方式除菌；辅助培养基成分有精氨酸、丙酮酸钠、辅酶Ι、青霉素和猪血清，辅助培养基各成分过滤除菌。

进一步的，所述基础培养基包括20×Hank′s浓缩液50～70ml、乳蛋白水解物0.5～3g、酵母提取物1～5g、牛心浸粉5～12g、海澡糖2～6g、去离子水779～883ml；辅助培养基包括5％精氨酸溶液1～5ml、3％丙酮酸钠溶液1～5ml、5％辅酶Ι2～5ml、10万U/ml青霉素5～10ml和灭活的健康猪血清50～100ml组成。