[发明专利]一种海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法及应用

权利要求书

1.一种海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，包括步骤：

脂质提取步骤：利用甲基叔丁基醚从待测海洋微生物中提取脂质样品；

数据采集步骤：利用离子淌度质谱法，采用正负离子模式，以甲醇和乙醇作为流动相，对所述脂质样品进行分析，并采集数据；

数据分析步骤：构建脂质分子结构数据库，并基于所述脂质分子结构数据库的协助，利用所采集的数据来注释所述待测海洋微生物中脂质分子的质谱特征。

2.根据权利要求1所述的海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，所述脂质提取步骤具体包括：

第一步，将待测海洋微生物捕获在聚偏氟乙烯膜上；

第二步，将第一步得到的聚偏氟乙烯膜放在干净的试管中，加入甲基叔丁基醚和甲醇进行提取，之后将装有提取液的试管旋转预定时间；

第三步，向第二步得到的提取液中加入水以诱导相分离，之后离心分离得到水相和有机相；

第四步，将第三步得到的上层有机相收集到干净的试管中，下层水相再按照相同步骤重新提取两次，合并收集到的所有有机相；

第五步，将第四步得到的所有有机相用离心浓缩机干燥，之后将干燥的脂质样品储存或者直接分析。

3.根据权利要求1所述的海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，所述脂质提取步骤之后，还包括：溶剂去除以及样品重组。

4.根据权利要求1所述的海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，所述数据采集步骤采用反相超高效液相色谱进行分析。

5.根据权利要求4所述的海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，所述数据采集步骤具体包括：

色谱分离：使用配备ACE Excel 2SuperC18柱的AQUITY UPLC系统，溶剂A为100％甲醇，溶剂B为100％乙醇，强力洗针剂为2-丙醇；线性梯度从100％溶剂A开始，保持4分钟后，然后在10分钟时增加到50％溶剂B，在30分钟时进一步增加到99％溶剂B，再保持4分钟，梯度在34.1分钟时返回到100％溶剂B，并重新平衡2分钟；流速为0.40mL/min，柱温保持在45℃，样品管理器温度保持在7℃；

质谱分析：使用配备有电喷雾源的Waters Synapt G2-Si系统，通过MassLynx软件进行控制，数据采集采用扩展动态范围模式的HDMS或HDMS^E，在分辨率模式下操作；其中，质量分析仪用碘化钠溶液进行质量校准，使用亮氨酸-脑啡肽作为锁链溶液。

6.根据权利要求5所述的海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，所述脂质样品进行分析的参数为：

毛细管电压为2.8kV和2.2kV，分别为正负离子模式；样品锥为40V，源温度为120℃；锥体气体为50L/h，脱溶气体为600L/h，雾化器气体为6.5Bar；捕获器直流偏压为60V，捕获器DE出口为3V；IMS波速为500m/s，波高为40V，转移波速为179m/s，波高为4V；所述脂质样品在150μl甲醇中重组；注入系统的脂质样品体积为10μl；扫描时间为0.4s；从50Da到2000Da，3.5min到34min的连续过程中获取数据。

7.根据权利要求1所述的海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，所述数据采集采用数据独立采集模式。

8.根据权利要求1所述的海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，所述数据分析步骤具体包括：

首先构建一系列的脂质分子结构，并保存为MOL文件；然后把MOL文件输入ProgenesisSDF Studio生成SFD文件，即得到所述脂质分子结构数据库；之后利用所述脂质分子结构数据库协助注释化合物分子的质谱特征。

9.根据权利要求8所述的海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法，其特征在于，基于得到的化合物分子的质谱特征，利用所述脂质分子结构数据库还可以得到断裂质谱数据库和离子淌度碰撞横截面积数据库。

10.一种海洋微生物脂类离子淌度质谱分析方法的应用，其特征在于，将如权利要求1-9任一所述的分析方法应用于海洋微生物脂类分析。