[发明专利]一种福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法

说明书

本发明提供了一种福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法，该方法包括如下步骤：向装有福尔马林固定石蜡包埋样本的离心管中加入二甲苯，离心；弃去离心管中的二甲苯，加入无水乙醇进行离心；弃去离心管中的无水乙醇，孵育直至无水乙醇全部蒸发；向离心管中加入超纯水，并吹打混匀至匀质；将匀质液澄清，再涡旋，加入洗脱缓冲液离心，纯化得到病原微生物核酸；本发明的病原微生物核酸宏基因的结果显示都在10％以下，经过宏基因高通量检测证实确实有效的方法，且去人源性的核酸能力极强，故本发明的福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法可以最大程度地去除人源背景，做到仅抽提病原微生物核酸的目的。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法。

背景技术

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，根据化学组成不同，核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用，因而核酸在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。核酸的研究可从本质上揭示微生物的结构、组成，甚至是致病机理的神秘面纱，可以更有效地研究如何预防、治疗由此产生的疾病，因此，对核酸的研究有着至关重要的意义。

针对目前临床的需求，想要对一些回顾性标本进行宏基因组检测。众所周知，石蜡标本为回顾性研究的首选，故针对临床痛点如何找到一个可以仅提取石蜡标本中病原微生物核酸的方法迫在眉睫。另外，目前病原微生物核酸的提取都是基于新鲜标本(血液、肺泡灌洗液、脓液等)，市面上并无专门从石蜡标本中单独抽提病原微生物的核酸的方法。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法。

为达到上述目的，本发明的解决方案是：

一种福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法，其包括如下步骤：

(1)、向装有福尔马林固定石蜡包埋样本的离心管中加入二甲苯，离心；

(2)、弃去离心管中的二甲苯，加入无水乙醇进行离心；

(3)、弃去离心管中的无水乙醇，孵育直至无水乙醇全部蒸发；

(4)、向离心管中加入超纯水，并吹打混匀至匀质；

(5)、将步骤(4)的匀质液澄清，再涡旋，加入洗脱缓冲液离心，纯化得到病原微生物核酸。

优选地，步骤(1)中，离心的转速可以为12000-15000rpm，优选为13000rpm；离心的时间可以为1-4min，优选为2min。

优选地，步骤(2)中，离心的转速可以为12000-15000rpm，优选为13000rpm；离心的时间可以为1-4min，优选为2min。

优选地，步骤(3)中，孵育的温度可以为50-60℃，优选为56℃；孵育的时间可以为1-10min，优选为5min。

优选地，步骤(5)中，洗脱缓冲液可以为90-100μL，优选为90μL。

优选地，步骤(5)中，涡旋的转速可以为1200-1800rpm，优选为1500rpm；涡旋的时间可以为1-4min，优选为3min。

由于采用上述方案，本发明的有益效果是：

本发明的病原微生物核酸宏基因的结果显示都在10％以下，经过宏基因高通量检测证实确实有效的方法，且去人源性的核酸能力极强，故本发明的方法可以最大程度地去除人源背景，做到仅抽提病原微生物核酸的目的。

具体实施方式

本发明提供了一种福尔马林固定石蜡包埋样本提取病原微生物核酸的方法。