[发明专利]一种衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法

权利要求书

1.一种衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1烟草根系样品提取：将内标物质与提取溶剂加入到烟草根系样品中，捣碎均质，超声提取，离心过滤得烟草根系提取溶液；

S2烟草根系提取溶液净化：依次加入甲醇与HCl活化固相萃取柱，活化后缓慢加入提取溶液，并依次加入HCl和甲醇淋洗，再加入洗脱溶液进行洗脱，收集洗脱溶液后氮气吹干得到净化的烟酸；

S3烟酸衍生化：向净化的烟酸中加入丙酮与衍生化试剂，加入缓冲溶液后混匀，在水浴加热反应条件下进行五氟溴苄衍生化，得烟酸衍生化产物；

S4烟酸衍生化产物的分散液液微萃取：向烟酸衍生化产物中加入水与萃取溶剂，涡旋混匀并加入NaCl，再次涡旋使NaCl完全溶解，离心后取沉淀相于微量色谱瓶中进行气相色谱-质谱分析；

S5烟酸衍生化产物的测定：采用气相色谱-质谱-选择性离子扫描的方式对烟酸衍生化产物进行分离与定量，以保留时间与质谱图比对进行定性，内标法定量。

2.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，在烟草根系样品提取中，内标物质为异烟酸。

3.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，在烟草根系样品提取中，提取溶剂为稀HCl溶液。

4.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，在烟草根系提取溶液净化中，固相萃取柱为PCX固相萃取柱。

5.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，在烟草根系提取溶液净化中，洗脱溶液为氨水与甲醇的混合溶液。

6.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，在烟酸衍生化中，衍生化试剂为2,3,4,5,6-五氟溴苄。

7.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，在烟酸衍生化中，缓冲溶液为磷酸缓冲液。

8.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，在烟酸衍生化中，衍生化反应条件为50-80℃下水浴加热反应30-60min。

9.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，在烟酸衍生化产物的分散液液微萃取中，萃取溶剂为四氯化碳。

10.根据权利要求1所述的衍生化-气相色谱-质谱方法分析烟草根系中烟酸的方法，其特征在于，气相色谱-质谱-选择性离子扫描的条件为：色谱柱：DB-1701；进样量：1μL；分流比：20：1；载气：氦气；流速：1.0mL/min；进样口温度：280℃；程序升温：初始温度50℃，保持3min，然后以每分钟18℃的速度升高到160℃，保持4min，再以20℃的速度升高到260℃，保持5min；离子源温度：230℃，四级杆温度：150℃；电离能：70eV，传输线温度：280℃，全扫描质量数范围35-400aum，溶剂延迟：8.20min；采集模式：全扫描与选择离子扫描同时采集。