[发明专利]一种同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法

说明书

本发明涉及一种同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，包括以下步骤：配制不同浓度的氨基酸标准溶液；将乳制品样品用微波消解仪进行消解，消解结束后得到消解液；将所述消解液冷却至室温，然后使冷却至室温的所述消解液流经滤膜进行过滤，收集滤液，将所述滤液稀释得到经处理后的乳制品样品；将所述氨基酸标准溶液、所述经处理后的乳制品样品分别注入液相色谱‑串联质谱联用仪中进行检测。本发明提供一种同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，可对乳制品中晚期糖基化终末产物多种氨基酸进行检测，解决了现有的检测时间长、成本高等问题。

技术领域

本发明涉及食品质量检测技术领域，特别涉及一种同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法。

背景技术

乳制品中含有赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸等对人体有益的氨基酸，在乳制品的加工及储藏过程中，乳制品中含羰基化合物和含氨基化合物(氨基酸、蛋白质)之间会发生美拉德反应生成不可消化利用的晚期糖基化终末产物(糠氨酸、羧甲基赖氨酸、羧乙基赖氨酸等)。乳制品中的美拉德反应会降低乳制品中的营养成分和生成有害产物。因此，乳制品中多种晚期糖基化终末产物可以成为乳制品质量监控指标。

目前，对乳制品的前处理大都采用烘箱水解，使用烘箱水解的检测方法需要水解20～24h，水解液还需经过固相萃取小柱进行萃取净化操作，因此，对乳制品的前处理存在效率低和操作复杂等问题。

发明内容

基于此，本发明提供一种同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，在实现对乳制品中晚期糖基化终末产物多种氨基酸进行检测的同时，解决了现有对乳制品前处理存在的效率低和操作复杂等问题。

一种同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，包括步骤：

配制不同浓度的氨基酸标准溶液；

将乳制品样品用微波消解仪进行消解，以将乳制品中和蛋白质结合的晚期糖基化终末产物氨基酸分子水解成游离态的氨基酸小分子，消解结束后得到消解液；

将所述消解液流经滤膜进行过滤，收集滤液，将所述滤液稀释得到经处理后的乳制品样品；

将所述氨基酸标准溶液、所述经处理后的乳制品样品分别注入液相色谱-串联质谱联用仪中进行检测。

优选地，所述氨基酸标准溶液包括溶剂和溶质，所述溶剂包括超纯水，所述溶质包括赖氨酸、糠氨酸、羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸。

优选地，所述消解的步骤包括：

将处理后的乳制品样品和6mol/L盐酸加入微波消解罐中，向所述微波消解罐中充入氮气以排除微波消解罐中的氧气，将所述微波消解罐置于微波消解仪中进行消解，消解结束后得到消解液。

优选地，消解温度为150℃，消解时间为15～20min。

优选地，每1mg蛋白质当量(1mg Pro)的经处理后的乳制品样品所用的盐酸为0.267mL。

优选地，所述滤膜的孔径为0.22μm。

优选地，将所述滤液稀释得经处理后的乳制品样品的具体步骤包括：

将所述滤液用超纯水稀释100倍得经处理后的乳制品样品。

在将所述氨基酸标准溶液、所述经处理后的乳制品样品分别注入液相色谱-串联质谱联用仪中进行检测的步骤中，液相色谱检测的具体过程如下：

将所述经处理后的乳制品样品置于液相色谱的进样器，流动相A、流动相B通过所述液相色谱的输液泵流经所述进样器，与所述经处理后的乳制品样品混合，混合后得到的混合液流经所述液相色谱柱，以使所述液相色谱柱对经处理后的乳制品样品中的待分析氨基酸进行分离，然后通过所述色谱的检测器对所述经处理后的乳制品样品中不同的氨基酸进行检测，以得到所述经处理后的乳制样品中的不同氨基酸的色谱图；