[发明专利]一种CAR-NK细胞及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种CAR‑NK细胞及其制备方法与应用，所述CAR‑NK细胞为在NK细胞表面表达靶向间皮素的CAR，所述CAR的结构包括特异性靶向间皮素的抗原识别区；还包括以下(i)至(v)特征中的至少一种：(i)CD8胞外先导序列；(ii)来自CD8的铰链；(iii)CD8/CD28跨膜区；(iv)胞内段共刺激信号41BB；(v)CD3ζ的胞浆信号传导序列。本发明的CAR‑NK细胞能够有效靶向间皮素高表达的肿瘤细胞，其对高表达间皮素肿瘤有较好的靶向杀伤作用，且具有较高的特异性和安全性，为该类肿瘤患者提供新的免疫细胞治疗药物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种CAR-NK细胞及其制备方法与应用。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)是基于基因工程改造并表达于细胞表面的受体蛋白，由抗原识别区(single chain variable fragment，scFv)、铰链区、跨膜区和胞内信号转导区组成。通过病毒感染或电转等方式使嵌合抗原受体表达在免疫细胞的表面从而构建成CAR-免疫细胞。CAR-T细胞治疗是近年来兴起的一种新的癌症治疗手段，也是当前抗肿瘤免疫治疗中的研究热点，通过基因工程方法改造免疫细胞，已成为肿瘤免疫细胞治疗的趋势。然而，CAR-T细胞在实体瘤治疗中仍然存在诸多障碍，例如在CAR-T细胞治疗安全性方面，在治疗中常会发生脱靶效应和产生细胞因子风暴。

NK细胞作为天然免疫系统中重要的一员，同样能够通过CAR修饰增强其抗肿瘤能力的效应细胞。NK细胞与T细胞相比具有以下优点：第一，同种异体来源的CAR-NK移植物抗宿主病的风险降低，细胞因子释放综合征(Cytokine Release Syndrome，CRS)和神经毒性较少；第二，除了CAR靶向杀死肿瘤靶细胞外，还存在其他杀伤肿瘤方式，通过CAR依赖性和NK细胞受体依赖机制杀伤肿瘤，因此CAR修饰的NK细胞可能能够有效地消除异质性；第三，同种异体NK细胞来源丰富，容易获取，能够大规模获取NK细胞，使得CAR-NK细胞有机会大规则临床使用，并且可以提供消除个性化的产品，解决困扰着当前的CAR-T细胞疗法基于个体的自体免疫细胞治疗产品处理起来比较复杂的难题。

但目前免疫CAR-NK细胞的开发和应用较少，因此，开发新型的CAR-NK细胞用于肿瘤等疾病的治疗具有十分重要的意义。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种CAR-NK细胞，能够特异性靶向间皮素，有效治疗肿瘤等疾病。

本发明还提出上述CAR-NK细胞的制备方法。

本发明还提出上述CAR-NK细胞的应用。

根据本发明的一个方面，提出了一种CAR-NK细胞，所述CAR-NK细胞为在NK细胞表面表达靶向间皮素的CAR，所述CAR的结构包括特异性靶向间皮素的抗原识别区；还包括以下(i)至(v)特征中的至少一种：(i)CD8胞外先导序列；(ii)来自CD8的铰链；(iii)CD8/CD28跨膜区；(iv)胞内段共刺激信号41BB；(v)CD3ζ的胞浆信号传导序列。

根据本发明的一种具体的实施方式，至少具有以下有益效果：本发明的CAR-NK细胞能够有效靶向间皮素高表达的肿瘤细胞，其对高表达间皮素肿瘤有较好的靶向杀伤作用，且具有较高的特异性和安全性，为该类肿瘤患者提供新的免疫细胞治疗药物；该CAR-NK细胞能够制备成“货架式产品”，冻存于液氮罐，满足患者随时需要，减少等待时间。