[发明专利]一种基于荧光定量PCR技术检测鱼致病链球菌的引物探针组及其试剂盒和应用

说明书

本发明提供了一种基于荧光定量PCR技术检测鱼致病链球菌的引物探针组及其试剂盒和应用，属于分子生物学技术领域。基于荧光定量PCR技术检测鱼致病链球菌菌株X16XC17和/或X13SY08的引物探针组，包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的正向引物和核苷酸如SEQ ID NO:2所示的反向引物以及核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的探针。所述引物探针组与qPCR MIX反应液、阳性对照和阴性对照组成检测试剂盒。所述试剂盒利用荧光定量PCR技术对待检样品DNA进行快速检测，通过实时扩增曲线判断样品是否为阳性样本，同时具备精准、灵敏、适用性广等优点。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种基于荧光定量PCR技术检测鱼致病链球菌的引物探针组及其试剂盒和应用。

背景技术

新型鱼致病链球菌菌株X16XC17和X13SY08是近年来在我国沿海地区新出现的一种鱼链球菌病病原。该两株菌高度同源，同属于链球菌属。由于暂未科学命名，本文中以其编号X16XC17和X13SY08指代。该新型链球菌属可致使病鱼表现出明显症状，包括游动异常、眼球突出、角膜混浊、眼出血和皮肤暗沉。该新兴致病菌的出现对当地高密度水产养殖业产生了重大的负面影响。因此，建立早期快速检测方法对鱼新型致病链球菌X16XC17和X13SY08感染的预防和控制具有十分重要的意义。目前尚未有将荧光定量 PCR技术应用于快速检测鱼致病链球菌菌株X16XC17和X13SY08的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于荧光定量PCR技术检测鱼致病链球菌的引物探针组及其试剂盒和应用，具有灵敏度高、特异性强、检测时间短、操作方便等优点。

本发明提供了一种检测鱼致病链球菌菌株X16XC17和/或X13SY08的特异性基因，所述特异性基因为neuB基因，核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

本发明提供了一种基于荧光定量PCR技术检测鱼致病链球菌菌株 X16XC17和/或X13SY08的引物探针组，包括引物对和探针；所述引物对和探针以所述特异性基因为模板设计得到；

所述引物对包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的正向引物和核苷酸如SEQ IDNO:2所示的反向引物；

所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

优选的，所述探针的5′端标记有荧光基团，3′端标记有淬灭基团。

优选的，所述荧光基团包括FAM，所述淬灭基团包括BHQ1。

优选的，正向引物、反向引物和探针的摩尔比为2：2：1。

本发明提供了一种基于荧光定量PCR技术检测鱼致病链球菌菌株 X16XC17和X13SY08的试剂盒，包括所述引物探针组。

优选的，还包括qPCRMIX反应液、阳性对照和阴性对照。

优选的，所述qPCRMIX反应液包含以下含量的组分：5U Taq酶、2.5mM dNTPs、25mMMgCl₂和2×PCRbuffer。

本发明提供了所述引物探针组在检测鱼致病链球菌菌株X16XC17和/或 X13SY08的试剂盒中的应用。

本发明提供了所述引物探针组或所述试剂盒在非诊断目的的检测鱼致病链球菌菌株X16XC17和/或X13SY08中的应用。

优选的，所述非诊断目的的检测鱼致病链球菌菌株X16XC17和/或 X13SY08的方法，包括以下步骤：

1)提取待检测样品的DNA；

2)以提取的DNA为模板，用所述引物探针组进行荧光定量PCR检测，得到样品的扩增曲线；