[发明专利]抗GH蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗GH蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。发明人还提供了一株分泌抗GH蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系9D5D2A9，保藏号为：CGMCC NO.22315。抗GH蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达GH蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗GH蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

人生长激素(hGH由脑垂体前叶的嗜酸性细胞分泌，是由191个氨基酸残基构成的单肽链蛋白质激素，分子量约为22000，含有两对二硫键且无糖基化修饰。具有刺激新陈代谢，促进组织、器官、骨骼以及整个人体发育成熟等功能，是个体生长发育过程中最重要的内分泌激素之一。hGH的分泌与释放受到GHRH和生长抑素(Somatostatin)的双向调控，其绝大多数的生理学作用都是通过GH-IGF轴来实现的。下丘脑垂体在GHRH的作用下释放hGH，hGH与肝脏或其他组织器官上GHR结合，通过GHR-JAK-STAT信号通路启动细胞核内的应答基因表达IGFs、IGFBP3和ALS，三者结合组成的三元络合物进入到血管，然后被输送到各个靶器官，再由蛋白酶降解去除IGFBP3和ALS，释放出IGFs实现生长激素的生物学作用。

垂体腺瘤是发病率第二位的中枢神经系统良性肿瘤,是鞍区最常见的肿瘤。垂体是人体内分泌中枢,其前叶由多种内分泌细胞组成。不同垂体前叶细胞分泌不同种类激素,如生长激素(growthhormomGH)、促肾上腺皮质激素、泌乳素、促甲状腺激素等。起源于分泌GH的垂体前叶细胞的肿瘤称为垂体GH腺瘤。过量GH及IGF-1影响患者多个内脏系统及内环境,导致心脏增大、呼吸道软组织增厚、肝脾增大、糖代谢紊乱、脂质再分布、物质代谢紊乱以及其他激素代谢异常等M。

垂体腺瘤的诊断除了依据临床症状、血清相关激素水平、影像学检查外,术后的病理诊断也相当重要。病理诊断包括组织化学染色法及免疫组织化学法。但组织化学染色法存在许多严重缺点。随着近年来医学科学的发展,免疫组化技术的应用使得对垂体腺瘤的诊断方法从形态学上升到功能学。免疫组化技术不仅可确定垂体腺瘤分泌激素的种类,还可以确定分泌激素细胞的数量及激素在细胞中的分布。而近年来病理免疫组化技术的应用,使我们能进一步对垂体腺瘤组织细胞所合成的激素进行检测,而这无疑为垂体腺瘤的诊断及其分类提供了强而有力的线索。

发明内容

发明人提供了一种抗GH蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。

进一步地，所述单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别人GH蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.22315的杂交瘤细胞系产生。所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系9D5D2A9，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2021年04月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

进一步地，所述抗GH蛋白为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。

发明人还提供了一种抗GH蛋白单克隆抗体的制备方法，其免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。