[发明专利]利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法

权利要求书

1.一种利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法，其特征在于，所述利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法包括：

步骤一，进行大白菜心叶颜色分子标记的筛选；选择心叶为白色的大白菜作为母本，选择心叶为桔红色或黄色的大白菜作为父本，将父本与母本进行杂交获得F1代心叶为白色的大白菜；

步骤二，利用得到的F1代心叶为白色的大白菜进行自交，得到F2代心叶为白色的大白菜；

步骤三，以得到的F2代心叶为白色的大白菜为母本，以初始心叶为白色的大白菜为父本进行回交，得到F3代心叶为白色的回交大白菜；

步骤四，对得到的得到F3代心叶为白色的回交大白菜，利用预先筛选得到的分子标记进行辅助选择心叶为桔红色或黄色目的性状基因转移的个体，获得F4代心叶为白色的大白菜；

步骤五，利用F4代心叶为白色的的大白菜进行自交，得到F5代心叶为白色的大白菜；

步骤六，重复步骤四至步骤五两次，在得到的大白菜群体中筛选出心叶为桔红色或黄色的大白菜，并依次自交、回交一次，得到心叶为桔红色或黄色的大白菜自交系。

2.如权利要求1所述利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法，其特征在于，所述进行大白菜心叶颜色分子标记的筛选包括：

取白色心叶纯合自交系大白菜、黄色心叶纯合自交系以及桔红色心叶纯合自交系进行杂交，得到杂交大白菜，杂交后培育获得重组自交系；

分别提取白色心叶纯合自交系大白菜、黄色心叶纯合自交系以及桔红色心叶纯合自交系亲本基因组DNA，利用SSR引物进行PCR扩增，筛选多态性SSR引物；

利用多态性SSR引物构建大白菜遗传连锁图谱；利用描述统计对群体数据实施正态性检验，对不契合正态分布的表现型数据进行标准化处理，对心叶花色突变位点进行QTL定位分析，确定与大白菜心叶花色连锁的分子标记。

3.如权利要求2所述利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法，其特征在于，所述提取基因组DNA包括：

使用离心管取适量的亲本白菜嫩叶圆片，向离心管中放入1粒直径为3mm钢珠，盖上离心管盖后进行粉碎；

向大白菜粉末中加入适量的0.2mol/L的NaOH溶液，混匀后将离心管置沸水浴中45s，再加120μL的Tris-Hcl，混匀后将所述离心管置沸水浴中1.5min，并离心；

取离心后的上清液到新的试管中，再加入1000μL的Tris-Hcl进行稀释溶解。

4.如权利要求3所述利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法，其特征在于，所述粉碎包括：在组织破碎机上以60-80次/s的转速破碎30-40s。

5.如权利要求3所述利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法，其特征在于，所述Tris-Hcl包括：pH＝7.5，质量分数为0.5mol/L。

6.如权利要求3所述利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法，其特征在于，所述离心包括：3000rpm离心6-8min。

7.如权利要求2所述利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法，其特征在于，所述进行QTL定位分析包括：

设定QTL的显著性水平为0.05，利用分析软件进行模拟运算，得到LOD的阈值；当某一位点的LOD值大于阈值时，则存在一个显著QTL位点；

采用区间作图法和完备区间作图法进行QTL定位，并估算QTL位置、加性效应、对表型变异的加性贡献率，及存在的QTL定位区间。

8.如权利要求1所述利用与大白菜花色相关的分子标记进行辅助育种的方法，其特征在于，所述对得到的得到F3代心叶为白色的回交大白菜，进行分子标记辅助选择心叶为桔红色或黄色目的性状基因转移的个体包括：

提取所述F3代心叶为白色的回交大白菜的DNA，并利用筛选得到的分子标记进行PCR扩增；

对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，选择F3代心叶为白色的回交大白菜中电泳带型与心叶为桔红色或黄色的大白菜相同的大白菜。