[发明专利]一种叶螨属常见种的快速鉴定方法

权利要求书

1.一种叶螨属常见种的快速鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)提取待鉴定叶螨总DNA；

(2)使用叶螨中扩增ITS的通用引物PCR扩增ITS序列；

(3)将上述PCR产物作为酶切模板，分别使用Rsa I、Mbo II、HpyF3 I、HinfI 4种酶进行酶切反应，取酶切产物，进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统下观察并拍照记录结果；

(4)将待鉴定图谱与标准酶切图谱比对，通过比较酶切条带的数量与位置从而确定待鉴定叶螨的物种。

2.根据权利要求1所述的叶螨属常见种的快速鉴定方法，其特征在于：所述的叶螨属常见种包括二斑叶螨绿色型、二斑叶螨红色型、截形叶螨、神泽叶螨、卢氏叶螨、豆叶螨、马来西亚叶螨或皮氏叶螨。

3.根据权利要求1所述的叶螨属常见种的快速鉴定方法，其特征在于：所述步骤(1)的提取方法包括：将预处理完的叶螨个体加入STE缓冲液，碾磨，确保碾磨至无可见的块状叶螨组织，加入蛋白酶K，蛋白酶充分接触研磨液后离心至管底，将离心管放入水浴锅孵育，再高温变性使蛋白酶K失活，待冷却至室温后即可作为DNA模板用于PCR扩增。

4.根据权利要求3所述的叶螨属常见种的快速鉴定方法，其特征在于：所述预处理采用100％酒精清洗。

5.根据权利要求1所述的叶螨属常见种的快速鉴定方法，其特征在于：所述步骤(2)PCR扩增引物：

序列1：上游引物：5′-GTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG-3′；

序列2：下游引物：5′-ATATGCTTAAGTTCAGCGGG-3′。

6.根据权利要求1所述的叶螨属常见种的快速鉴定方法，其特征在于：所述步骤(2)PCR扩增引物：

序列3：上游引物：5′-AGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAG-3′；

序列4：下游引物：5′-ATATGCTTAAATTCAGCGGG-3′。