[发明专利]一种凝胶组合物、生物支架凝胶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种生物支架凝胶，其特征在于：按照终浓度组成为：聚乙二醇，0.01-0.5g/ml；胶原蛋白，0.02-0.5g/ml；层粘连蛋白，0.05-100ng/ml；B27，0.5-5×；N2，0.5-5×；N-乙酰半胱氨酸，0.1-50μM；烟酰胺，10-200μM；Wnt信号通路激动剂，25-500ng/ml；表皮细胞生长因子，10-500ng/ml；ROCK抑制剂，0.5-100 ng/ml；RGD多肽，0.1-1mg/ml；以上成分均溶于缓冲液或基础培养基中，所述基础培养基为1640、DMEM、F12、神经基础培养基、DMEM/F12培养基中的一种；当采用缓冲液时，所述生物支架凝胶中还加入pH调节剂。

2.根据权利要求1所述的一种生物支架凝胶，其特征在于：所述Wnt信号通路激动剂为Wnt3A、R-spondin1、Noggin中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的一种生物支架凝胶，其特征在于：所述ROCK抑制剂为杂氮吲哚1、GSK269962A、AT13148、GSK429286A、瑞舒地尔、Y27632、羟基法舒地尔中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的一种生物支架凝胶，其特征在于：所述缓冲液为Tris、HEPES、PBS、HBSS缓冲液中的一种。

5.权利要求1~4任意一项所述的生物支架凝胶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

按照生物支架凝胶的终浓度组成配料，先将B27、N2、N-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、Wnt信号通路激动剂、表皮细胞生长因子、ROCK抑制剂、RGD多肽用缓冲液或基础培养基溶解，然后加入聚乙二醇、胶原蛋白、层粘连蛋白混匀，即得。

6.一种3D细胞培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）将来源为组织、恶性积液或细胞系的新鲜样本进行预处理，得到细胞数量为3-50个细胞的细胞团后，离心去除上清备用；

2）将细胞培养基与权利要求1~4任意一项所述的生物支架凝胶按照适宜配比混合得到混合凝胶培养液，然后用混合凝胶培养液重悬步骤1）得到的细胞团沉淀，接种胶滴或者铺于Transwell小室后于20-37℃静置2~3min，之后倒置胶滴继续保温静置，待其充分凝固；

3）将步骤2）获得的胶滴于室温下继续静置10~15min，进一步加入37℃预热的细胞培养基，并于37℃、5% CO₂浓度下培养，每隔2-3天更换一次细胞培养基，培养4-10天后得到类器官或细胞团。

7.根据权利要求6所述的一种3D细胞培养方法，其特征在于：所述将细胞培养基与权利要求1~4任意一项所述的生物支架凝胶按照适宜配比混合，所述配比为体积配比1：（1~20）。