[发明专利]一种治疗高脂血症的贻贝降血脂寡肽

说明书

本发明提供了一种贻贝降血脂肽Tyr‑Ser‑Gly‑Arg‑Gly‑Trp‑Ile‑Pro‑Phe及其制备，本发明Tyr‑Ser‑Gly‑Arg‑Gly‑Trp‑Ile‑Pro‑Phe（YSGRGWIPF）能显著降低油酸诱导的HepG2细胞脂质堆积模型内脂质、胆固醇和甘油三酯含量，且能显著降低实验性高脂血症大鼠血清中的胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量，并能显著提高高密度脂蛋白胆固醇含量。可作为降血脂功能分子应用于治疗或者辅助治疗高脂血症的特医食品、保健品和药物。

技术领域

本发明涉及多肽技术领域，具体涉及一种治疗高脂血症的贻贝降血脂寡肽。

背景技术

高脂血症（Hyperlipidemia，HLP），也称血脂异常或者脂蛋白异常血症，是由各种原因导致的血浆中的胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）以及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）水平升高和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）过低的一种的全身脂质代谢。高脂血症（HLP）是动脉粥样硬化、胰腺炎、冠心病等疾病的危险因素。另外，高血脂症还可以导致糖尿病、脂肪肝、肝硬化、甲状腺功能减退、胰腺炎、高尿酸血症、肾病综合征等。降血脂药物通过调整血清中脂质含量、TC、TG、LDL-c和HDL-c等指标，改善机体脂质代谢。目前，由于毒副作用等因素，广泛使用的降血脂西药，如HMG-CoA 还原酶抑制剂(他汀类药物)，面临诸多问题。因此，研发新的高效、无毒副作用治疗高脂血症的药物尤为重要。

发明内容

本发明以资源丰富的贻贝蛋白为原料，以降低油酸（OA）诱导的HepG2细胞脂质堆积模型中的脂质含量为指标，设计新的制备工艺，制备得到了降血脂功能显著且安全无毒性的降血脂肽，该降血脂肽可应用于治疗或者辅助治疗高脂血症。

本发明提供了一种贻贝降血脂肽Tyr-Ser-Gly-Arg-Gly-Trp-Ile-Pro-Phe（YSGRGWIPF），ESI-MS测定其分子量为1082.21 Da。

一种贻贝降血脂肽Tyr-Ser-Gly-Arg-Gly-Trp-Ile-Pro-Phe的制备，其包括以下步骤：

1）原料预处理：紫贻贝（Mytilus edulis）去壳和内脏、清洗、匀浆，加入乙酸乙酯，250 W超声脱脂25 min，过滤，重复3次上述脱脂操作，脱除脂质；干燥过滤所得固体物，研磨，得脱脂贻贝粉；

 2）贻贝虾粉的酶解：取脱脂贻贝粉，加入缓冲液，调节pH值至7.0，加入贻贝粉重量2.5%中性蛋白酶，48℃酶解5小时，于沸水浴灭酶10 min，冷却至室温，后于12000 rmp离心15 min，收集上清液，得酶解液（MNH）。

3）贻贝寡肽的分离提取：将上述贻贝蛋白酶解液MNH利用截留分子量为3.0 kDa的超滤膜分级，收集超滤组分MNH-I（分子量大于3.0 kDa）和MNH-II（分子量小于3.0 kDa），测定超滤组分MNH-I和MNH-II对油酸（OA）诱导的HepG2细胞脂质堆积模型中脂质降低能力（用%空白组表示）（见表1），选择降脂能力最强的超滤组分MNH-II依次经凝胶色谱柱分离和反相高效液相色谱RP-HPLC纯化。

作为优选，所述步骤1）中的匀浆后的紫贻贝与乙酸乙酯的重量体积比为1g:9 mL。

作为优选，所述步骤2）中脱脂贻贝粉与缓冲液的重量体积比为1g:6 mL。

作为优选，所述步骤2）中缓冲液为pH为7的磷酸盐缓冲液。

作为优选，所述的步骤2）中的中性蛋白酶的酶活力≥2.0×10⁵U/g。

作为优选，所述步骤3）中的凝胶色谱柱分离步骤为：