[发明专利]一种高通量快速检测沙门氏菌毒力的秀丽隐杆线虫感染模型及制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种高通量快速检测沙门氏菌毒力的秀丽隐杆线虫感染模型及制备方法与应用，属于生物技术领域。该模型包括：所述秀丽隐杆线虫为sek‑1、glp‑1基因缺陷型秀丽隐杆线虫；所述沙门氏菌感染秀丽隐杆线虫的培养基为S‑medium缓冲液，pH为7.0±0.2；所述沙门氏菌的感染浓度为10⁷‑10¹¹CFU/mL。在感染第2‑4时线虫存活率开始出现明显差异，初步判断出致病性。可见，本发明通过建立沙门氏菌感染秀丽隐杆线虫模型，可以实现快速、简便、高效检测沙门氏菌毒力，为沙门氏菌的致病机理研究以及相关药物筛选提供理论基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种高通量快速检测沙门氏菌毒力的秀丽隐杆线虫感染模型及制备方法与应用。

背景技术

沙门氏菌是沙门氏菌病的病原体，属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌，目前已有近千种。菌体大小(0.6-0.9)×(1-3)μm，无芽胞，一般无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，大多有周身鞭毛。营养要求不高，分离培养常采用肠道选择鉴别培养基。生化反应对本菌的鉴别具有重要参考意义。沙门氏菌属具有较强的致病性，是引起人畜共患病的重要病原之一，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外，还可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌状态，也可表现为有临床症状，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力，给畜牧养殖业带来巨大的经济损失，因此寻找一种简单便捷的检测沙门氏菌毒力并研究其致病机理的方法非常有必要。

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种生活在土壤中的小型线虫，以细菌为食，是一种典型的模式生物，有以下几个特点：身体透明，结构简单，易于观察；生命周期短，分为4个阶段：胚胎发育期、生长发育期、生殖期和生殖后期。在20℃的环境下，3.5d即可完成一个生命周期，可大大缩短试验时间；基因序列已知，每一个细胞的起源都完全清楚；遗传序列与哺乳动物有40％的同源性等。这些特性使得秀丽隐杆线虫与小鼠、大鼠、兔子等实验动物相比有极大的简便性和实用性，更节约时间、精力和成本。目前秀丽隐杆线虫已广泛应用于毒理学、疾病模型、病原菌致病模型等研究。秀丽隐杆线虫用于衰老研究、药物毒理、药物筛选等的报道屡见不鲜，目前，研究者已建立了50多种线虫模型，其中包括细菌、真菌和病毒。细菌有鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等。但沙门氏菌感染秀丽线虫的致病模型国内尚未见报道。

目前，秀丽隐杆线虫感染模型以经典的固体平板杀线虫的方法居多，但是固体平板杀线虫的方法有诸多不足：成本高，费时费力；线虫会根据致病菌的不同气味避开致病菌而拒食，达不到感染的目的；为躲避致病菌而爬到平皿壁上的线虫数量也不计入致病菌的致死率中，造成试验误差。因此，亟需一种简便、高效、快捷检测致病菌毒力的方法以为研究致病菌致病机理，以及临床抗感染治疗提供科学的理论依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种高通量快速检测沙门氏菌毒力的秀丽隐杆线虫感染模型及制备方法与应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过建立沙门氏菌感染秀丽隐杆线虫模型，可以实现快速、简便、高效检测沙门氏菌毒力，为沙门氏菌的致病机理研究以及相关药物开发提供理论基础。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种高通量快速检测沙门氏菌毒力的秀丽隐杆线虫感染模型，所述秀丽隐杆线虫为sek-1、glp-1基因缺陷型秀丽隐杆线虫；所述沙门氏菌感染秀丽隐杆线虫的培养基为S-medium缓冲液，pH为7.0±0.2；所述沙门氏菌的感染浓度为10⁷-10¹¹CFU/mL，感染第2-4d线虫存活率开始存在明显差异，已能初步判断致病性，可达到快速筛选的目的。

本发明还提供一种所述的模型在筛选抗沙门氏菌药物中的应用。

本发明还提供一种所述的模型的制备方法，包括以下步骤：

(1)沙门氏菌的培养及菌液的制备；