[发明专利]一种不动杆菌及其应用

说明书

本发明涉及一种不动杆菌及其应用，不动杆菌(Acinetobacteroleivorans)KX‑3的保藏编号为CGMCC No.23119，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明菌株在乙酸钠为碳源，菌株接种量为0.5％，C/N＝12，pH＝10.0，温度15℃条件下，可去除76.7％的氨氮与67.2％的NO₃^‑。为生物脱氮提供了良好的菌种资源。

技术领域

本发明属于微生物领域，特别涉及一种不动杆菌及其应用。

背景技术

当今，因人类活动影响，城市河道及相对开放的水域氨氮指标高居不下。由此引发的生态环境问题已经对人类居家环境和城市形象产生重大影响。传统上，养分主要通过生物处理去除，而生物养分去除过程需要替代厌氧/好氧条件，使得处理系统复杂且耗能。微生物修复水环境成为目前研究的热点领域，目前在针对污水水体氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐的去除也正在随着对硝化细菌，反硝化细菌的研究而逐渐提升到新的层次。

生物脱氮主要依靠硝化过程和反硝化过程两个阶段，但参与到这两个过程的微生物生长和处理能力会受到pH,温度，溶解氧，C/N，接种量等各方面的影响。由于温度是影响微生物活性的主要因素，而低温下实现高效稳定的生物脱氮较为困难。据已有的研究表明，反硝化作用适合的温度范围是25℃-35℃，低于25℃反硝化作用会得到抑制。而耐冷菌由于其不同的生理构造、低温下活跃的酶活性及适应性宽泛的温度范围，在环境工程和生物应用等多领域受到广泛研讨和实际应用。在低温下分离和筛选具有耐冷性的脱氮功能菌对于微生物脱氮领域显得意义重大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种不动杆菌及其应用，填补现有低温微生物脱氮的空白。

本发明的一种不动杆菌，不动杆菌(Acinetobacter oleivorans)KX-3的保藏编号为CGMCC No.23119，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的一种所述不动杆菌筛选方法(碱性条件下耐低温同步异养硝化-好氧反硝化微生物菌株的分离方法)，包括：

(1)菌株富集：将土壤和无菌水混合，得到悬液，然后将1mL悬液于富集培养基中，10-15℃振荡培养2-3天；

(2)将取步骤(1)中的富集培养液，加入反硝化培养基中，10-15℃振荡培养46-50h，得到富集液；

(3)取步骤(2)富集液加入反硝化培养基中，10-15℃振荡培养，并测试NO₃^-的去除效率；重复该步骤直到NO₃^-的去除效率达到稳定80％以上；

(4)取步骤(3)NO₃^-去除率达到稳定80％以上的悬液进行稀释，10^-1～10^-8涂布在溴百里酚蓝培养基中，于15℃培养直至出现可见的菌株周边变蓝菌落；

(5)将上述步骤(4)中长出的变蓝菌落用接种环挑出至固体LB培养基平板上，反复划线3-5次，直到出现单菌落为止。

(6)菌株反硝化能力测定：将上述步骤(5)中纯化出的单菌落用无菌接种环挑出至反硝化液体培养基中，于15℃，150r/min振荡，每隔4h测定菌株反硝化能力；

(7)菌株硝化能力测定：挑选上述步骤(6)高效脱除NO₃^-的反硝化菌转入硝化培养基进一步测试NH₄⁺-N的去除能力。

上述步骤的优选方式如下：

所述步骤(1)中土壤和无菌水的体积比例为1:9。

所述步骤(1)中土壤为取南极拉斯曼丘陵地区的土壤。