[发明专利]一种基于miR-1205的幽门螺旋杆菌阳性胃癌检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种基于miR‑1205的幽门螺旋杆菌阳性胃癌检测试剂盒，包括miR‑1205的特异性引物、人源U6基因的特异性引物。本发明以与H.pylori阳性胃癌密切正相关的miR‑1205为核心，利用特异性引物进行荧光定量PCR，检测胃癌组织样本，具有较高的敏感性和特异性，弥补了现有H.pylori感染检测手段的不足，为临床个体化治疗提供了帮助；本试剂盒检测准确性达95.31％，整个检测过程仅需2小时，检测效率高，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学及生物医学技术领域，具体涉及一种基于miR-1205的幽门螺旋杆菌阳性胃癌检测试剂盒及其应用。

背景技术

胃癌(Gastric cancer)是影响人们健康的重大疾病，近年来随着科学研究深入及医疗水平提升，其发病率虽有所下降，但其在肿瘤死亡病例中仍位居第二。胃癌起源于胃黏膜上皮细胞，其发生发展是一个多因素、多水平、多阶段的过程，很多危险因素参与其中，如饮食因素、环境因素及遗传因素。研究显示，幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染与胃癌的发生发展密切相关。H.pylori是革兰氏阴性微需氧的细菌，生存于胃部及十二指肠的各区域内。H.pylori感染会引起胃黏膜的慢性炎症，甚至导致胃及十二指肠溃疡与胃癌的发生，已经被世界卫生组织(WHO)列为胃癌的I类危险因子。

大样本的长期随访研究证实，胃癌患者在接受H.pylori根治后的预后结果要显著好于不根治的患者。因此，胃癌是否伴有H.pylori感染影响患者临床治疗方案的制定。目前H.pylori的常见检测方法包括尿素呼气试验(UBT)、粪便Hp抗原检测(SAT)、抗H.pyloriIgG抗体的血清学试验和细菌学培养。胃镜下的组织病理活检是检测胃癌的金标准，如果能够在确定胃癌时同时检测H.pylori感染，能够及时为患者设计治疗方案并缩短治疗时间。显然，目前H.pylori的检测方法很难办到。例如，患者胃出血会造成UBT的假阴性结果，血清学试验由于其抗体效价能维持很长时间无法区分过去和现在的H.pylori感染，体外培养H.pylori既费时又费力，SAT结果的准确性受多种因素，如抗菌药物和上消化道出血的影响。

微小RNA(microRNAs)是一种长度为22-28个核苷酸的RNA分子，广泛存在于真核生物中。研究显示，H.pylori感染能够影响microRNAs的表达。有鉴于上述现有的H.pylori检测技术中存在的缺陷，本发明人基于microRNAs设计了一种胃癌组织幽门螺旋杆菌检测试剂盒及其应用方法，通过常规荧光定量PCR检测手段，达到准确、快速检测幽门螺旋杆菌的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于miR-1205的幽门螺旋杆菌阳性胃癌检测试剂盒及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于miR-1205的幽门螺旋杆菌阳性胃癌检测试剂盒，包括miR-1205的特异性引物、人源U6基因的特异性引物，其中

所述miR-1205的特异性引物的序列如下：

SEQ ID NO.5：5′-CACGCATCTGCAGGGTTT-3′，

SEQ ID NO.6：5′-CCAGTGCAGGGTCCGAGGTA-3′；

所述人源U6基因的特异性引物的序列如下：

SEQ ID NO.7：5′-GCGCGTCGTGAAGCGTTC-3′，

SEQ ID NO.8：5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。

优选的是，所述miR-1205的核苷酸序列为5′-TCTGCAGGGTTTGCTTTGAG-3′。