[发明专利]一种高效生产(2S,3S)-2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种高效生产(2S,3S)-2,3-丁二醇的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌同时表达金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌中的2,3-丁二醇脱氢酶，或者同时表达金黄色葡萄球菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3-丁二醇脱氢酶，或者同时表达肺炎克雷伯氏菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3-丁二醇脱氢酶；

所述2,3-丁二醇脱氢酶为来自肺炎克雷伯氏菌，谷氨酸棒杆菌以及金黄色葡萄球菌的2,3-丁二醇脱氢酶，其编码基因分别为KbudC，GbudC，LbudC，核苷酸序列分别如SEQ IDNO.1，SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3所示；

所述基因工程菌为重组的大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌同时表达金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌中的2,3-丁二醇脱氢酶时，基因工程菌构建所用的表达载体中编码基因LbudC位于pET28a质粒，KbudC位于pETDuet-1质粒；所述基因工程菌同时表达金黄色葡萄球菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3-丁二醇脱氢酶时，基因工程菌构建所用的表达载体中编码基因LbudC位于pET28a质粒，GbudC位于pETDuet-1质粒；所述基因工程菌同时表达肺炎克雷伯氏菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3-丁二醇脱氢酶时，基因工程菌构建所用的表达载体中编码基因KbudC位于pET28a质粒，GbudC位于pETDuet-1质粒。

3.权利要求1所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将肺炎克雷伯氏菌，谷氨酸棒杆菌以及金黄色葡萄球菌中的2,3-丁二醇脱氢酶基因KbudC，GbudC，LbudC分别插入pET28a，构建表达载体质粒pET28a-KbudC，pET28a-GbudC和pET28a-LbudC；

（2）将肺炎克雷伯氏菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3-丁二醇脱氢酶基因KbudC和GbudC分别插入pETDuet-1质粒，构建表达载体质粒pETDuet-KbudC和pETDuet-GbudC；

（3）将表达载体pET28a-KbudC、pET28a-GbudC、pET28a-LbudC转化进大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞，挑选阳性重组子，得重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-KbudC、E.coli BL21(DE3)/pET28a-GbudC和E.coli BL21(DE3)/pET28a-LbudC；

（4）将表达载体pETDuet-KbudC转化进重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-LbudC，将表达载体pETDuet-GbudC分别转化进重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-LbudC和重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-KbudC，挑选阳性重组子，得基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-LbudC/pETDuet-KbudC、E.coli BL21(DE3)/pET28a-KbudC/pETDuet-GbudC和E.coli BL21(DE3)/pET28a -LbudC/pETDuet-GbudC。