[发明专利]一种口岸截获粉蚧检疫鉴定玻片的快速制作方法

说明书

本发明涉及生物玻片的制作方法技术领域，具体公开了一种口岸截获粉蚧检疫鉴定玻片的快速制作方法，包括：（1）样品固定；（2）样品净化；（3）样品漂洗；（4）样品染色；（5）样品清洗；（6）样品固色；（7）样品清理；（8）样品封盖。本发明采用高浓度酸性品红进行粉蚧样品的染色介质，将粉蚧样品放到装有98%的酸性品红的EP管，并放到恒温震荡仪中进行恒温震荡染色，1个小时即可完成染色，与改进前的，粉蚧样品放到凹面皿中静置8‑12小时染色相比，大大缩短了染色效率，缩短了样品的鉴定时间，实现了粉蚧鉴定时间从原来当天送样第二天出具结果报告，变成现在的早上送样，当天下午出鉴定结果的快速检测，减少的了进境果蔬的通关成本，提高果蔬的通关效率。

技术领域

本发明属于生物玻片的制作方法技术领域，特别涉及一种口岸截获粉蚧检疫鉴定玻片的快速制作方法。

背景技术

粉蚧是小型吸汁昆虫，属于粉蚧属，分布全球，是热带、亚热带经济作物的重要害虫。危害果树、花卉、多肉等植物，常群集于枝、叶、果上，吸取植物汁液为生，严重时会造成植株死亡。粉蚧体表被白色或乳黄色蜡质覆盖物，酷似白粉披身。粉蚧雌成虫卵圆形，少数长形、圆球形或不对称型。体壁柔软。前胸背板和头部无明显分界。腹部体节明显。少数雌体完全无蜡被而裸露。雄虫成体纤细，头、胸和腹分明。触角3~10节。单眼4~6个，无复眼。膜质翅1对。有的缺膜质前翅和平衡棒。足细长。腹部倒数第二节有两个管状腺，雄成虫由此分泌出两条白色细长并较坚韧的蜡丝。交尾器短，雄虫幼虫常在白色蜡质茧里发育。

粉蚧是进境新鲜果蔬中常见的有害生物，也是一种重要的口岸有害生物检疫对象。由于粉蚧体型较小，且体表常被白色或乳黄色蜡质覆盖，一般需要经过实验室制作整理，才能在显微镜下观察其形态结构。传统的粉蚧玻片制作周期长，其中，染色步骤需要将粉蚧放到培养皿中静置8-12h进行染色，粉蚧的鉴定一般是当天送样第二天出结果报告，这样导致进境新鲜果蔬因为海关部门的检疫鉴定结果的原因，滞留口岸，增加了通关成本。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺陷，提供一种口岸截获粉蚧检疫鉴定玻片的快速制作方法，缩短粉蚧玻片的制作周期，提升口岸有害生物的的快速检疫鉴定，减少新鲜果蔬的通关成本，提高通关效率。

为实现上述目的，本发明提供了一种口岸截获粉蚧检疫鉴定玻片的快速制作方法，包括如下步骤：

（1）样品固定：挑取粉蚧样品置于预装有70%乙醇溶液的容器中杀死并浸泡固定2h以上；

（2）样品净化：将上述固定好的样品置于载玻片上，在体视显微镜下观察并用毛笔轻轻去除虫体表面未溶解的蜡粉和其他杂质；接着用刀具在虫体背面头胸处纵向切一个小口；然后移入预热至90-95℃的碱性溶液中水浴5-10min；当虫体柔软时，用毛笔等轻轻挤压，尽可能挤出内含物，挤压动作要轻柔，注意保持虫体的完整性；随后将虫体移至70℃的热清水中清洗去杂，直至虫体透明；

（3）样品漂洗：将除杂后的样本移入装有70%乙醇溶液的凹面皿中脱水5min；轻轻挤压虫体，进一步去除碱液及其溶解的内含物；

（4）样品染色：将粉蚧样品放入装有98%的酸性品红的EP管，放置到自制的恒温震荡仪中，保持55摄氏度，同时加施震荡，保持1h以上；

（5）样品清洗：将染色的样本移入装有70%乙醇溶液的凹面皿去除浮色；更换乙醇溶液清洗1-2次；

（6）样品固色：将步骤（5）处理过的样本移入装有丁香油的容器中浸泡透明10min并固定颜色，再将样本移入70%乙醇溶液中清理丁香油和其他杂质；

（7）样品清理：在霍氏封片液浸泡10min以上，再次清理虫体内外杂物；

（8）样品封盖：取载玻片滴入适量霍氏封片液，将样本移入霍氏封片液并整姿，盖上玻片封片，即可镜检。

优选的，步骤（1）中，对于需长期保存的样品，在70%乙醇溶液中加入甘油，所述甘油的添加量与70%乙醇溶液的体积比为1-2:50。

优选的，步骤（2）中，所述刀具为解剖刀或眼科手术刀。