[发明专利]一种波茨坦短芽孢杆菌、中性蛋白分解酶及其应用

权利要求书

1.一种波茨坦短芽孢杆菌（Brevibacillus borstelensis），被命名为Fjfst-20210713，其保藏编号为CCTCC NO：2021906。

2.一种中性蛋白分解酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）液体培养基灭菌、冷却后接种权利要求1中的波茨坦短芽孢杆菌落，接种后于45℃，200 rpm 摇床培养24 h 后得到种子发酵液；

2）发酵培养基灭菌、冷却后，按2%-10%的接种量将种子发酵液接入发酵培养基中，接着在60℃培养24 h 后得到含中性蛋白分解酶的发酵液；

3）将含中性蛋白分解酶的发酵液经过4℃，8000 g冷冻离心15 min后取上清液；

4）将上清液加入质量分数为60% 的饱和硫酸铵溶液中进行盐析，放置冰箱过夜后，4℃、8000 g 离心35 min 取沉淀；

5）沉淀置于0.1 mol/L PBS 缓冲液中溶解，而后置于透析袋中透析；

6）用0.1 mol/L PBS缓冲液对Q-Sepharose Fast Flow 冲过2-3 床体积后，取5 ml 透析液上样，上样平衡后，用2-3 床0.01-0.1 mol/L PBS 缓冲液洗去杂质，然后用含2 mol/L的NaCl 的0.1 mol/L PBS 缓冲液进行梯度洗脱，收集有活性的中性蛋白分解酶，将有活性的中性蛋白分解酶合并，充分透析脱盐，进行冷冻干燥，得粗酶粉；

7）取粗酶粉0.1 g，溶于5 ml的0.01-0.1 mol/L PBS 缓冲液中，待使用0.01-0.1 mol/L PBS 缓冲液对Sephacryl S-100 凝胶柱冲过4-5 床体积之后取5 ml样液上柱，并用0.01-0.1 mol/L PBS 缓冲液洗脱，将液体合并进行冷冻干燥，即成中性蛋白分解酶。

3.一种如权利要求2制备方法制得的中性蛋白分解酶的应用，其特征在于，所述中性蛋白分解酶用于燕窝蛋白降解制备燕窝肽。

4.根据权利要求3所述的中性蛋白分解酶的应用，其特征在于，所述中性蛋白分解酶用于燕窝蛋白降解制备燕窝肽，具体步骤如下：

将燕窝粉末用去离子水浸泡，然后通过超声，破壁得燕窝混合液，调节燕窝混合液的pH值为5.5-8.5；加入中性蛋白酶在恒温加热及间歇式搅拌的条件下酶解；

酶解结束后在沸水浴中灭活6-8min，将酶解液通过分离设备进行分离得清液，将清液浓缩干燥，得到燕窝小分子肽。