[发明专利]一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用

说明书

本发明属于生物抗菌肽技术领域，具体涉及一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用。本发明提供了一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法，包括如下步骤：采用混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫；针刺所述饲喂诱导后的黄粉虫幼虫背部节间处，得到针刺诱导后的黄粉虫幼虫；将所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫于紫外光下照射后，培养24小时，得到含有抗菌肽的黄粉虫。与常规诱导方法相比，本发明对黄粉虫采用复合诱导，采用本发明提供的诱导方法和诱导顺序对黄粉虫进行刺激，能够更大程度地提高抗菌肽的含量。

技术领域

本发明属于生物抗菌肽技术领域，具体涉及一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用。

背景技术

近年来，随着我国水产养殖业的不断发展，鱼类感染链球菌病的现象也不断发生。我国养殖户预防鱼类受到病原菌侵染的手段一般是在每年夏季疾病爆发期来临之前，向养殖区域里投入大量抗生素，初期有一定效果，但随着时间延长，细菌容易出现耐药性，减弱了抗生素的效果。并且，2019年农村农业部发布“禁抗令”，停止生产含有促生长类的药物添加剂的动物饲料。因此，亟需寻求一种抗生素替代物。

现有研究表明抗菌肽对真菌、细菌均有抑制作用，将其添加至饲料中还能够促进畜禽生长，应用至水产养殖业能够抵御链球菌的侵染。黄粉虫抗菌肽是黄粉虫在自然状态或者诱导条件下产生的一种小分子多肽，然而自然状态或现有的诱导条件下黄粉虫体内抗菌肽的含量太低。因而，提供一种可有效提高黄粉虫体内抗菌肽含量的方法对提高黄粉虫抗菌肽的产量和应用具备至关重要的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用，本发明提供的诱导黄粉虫产抗菌肽的方法可以有效提高黄粉虫体内抗菌肽的含量。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法，包括如下步骤：采用混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫；

针刺所述饲喂诱导后的黄粉虫幼虫背部节间处，得到针刺诱导后的黄粉虫幼虫；

将所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫于紫外光下照射后，培养24小时，得到含有抗菌肽的黄粉虫。

优选的，所述黄粉虫幼虫的龄期为6～15龄；所述针刺的次数为1～3次；所述针刺包括直接针刺或蘸取大肠杆菌菌液针刺。

优选的，所述饲料与所述大肠杆菌菌液的质量体积比为1.5～3g:1～2mL；所述大肠杆菌的浓度为0.5～1个麦氏浊度。

优选的，所述紫外光所使用紫外灯的功率为22～28W；所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫距所述紫外灯的垂直距离为20～30cm；所述紫外光的照射时间为30～60min。

本发明提供了一种黄粉虫抗菌肽的制备方法，包括如下步骤：将上述技术方案中诱导得到的含有抗菌肽的黄粉虫幼虫经乙酸铵提取液提取获得抗菌肽粗提液；

将所述抗菌肽粗提液经葡聚糖凝胶层析柱过滤，得到黄粉虫抗菌肽。

优选的，所述含有抗菌肽的黄粉虫幼虫与所述乙酸铵提取液的质量体积比为1～2g:2.5～3mL。

优选的，所述乙酸铵提取液包括乙酸铵缓冲液、苯甲基磺酰氟和巯基乙醇；

所述乙酸铵缓冲液的物质的量浓度为0.04～0.05mol/L，pH为5；

所述苯甲基磺酰氟的质量浓度为32～36μg/mL；

所述巯基乙醇的质量百分浓度为1.8～2‰。

优选的，所述葡聚糖凝胶层析柱过滤使用的洗脱液包括乙酸铵缓冲液或生理盐水；所述洗脱液的流速为0.65～0.7mL/min；