[发明专利]用于HLA-DPB*0202基因检测的引物组、试剂盒及其方法

说明书

本申请公开了一种用于HLA‑DPB*0202基因检测的引物组、试剂盒及其方法,其属于生物医药工程的技术领域，其中用于HLA‑DPB*0202基因检测的引物组包括前向外引物F3、前向内引物FIP、后向外引物B3以及后向内引物BIP；前向外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；前向内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；后向外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；后向内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。本申请具有对HLA‑DBP1*0202基因进行快速检测、缩短检测时间的效果。

技术领域

本申请涉及生物医药工程的技术领域，尤其是涉及一种用于HLA-DPB*0202基因检测的引物组、试剂盒及其方法。

背景技术

格雷夫斯病(GD)又称为毒性弥漫性甲状腺肿，是一种自身免疫紊乱的免疫学疾病，其临床表现不仅限于甲状腺，而是一种多系统的综合征，包括高代谢症候群、弥漫性甲状腺肿、眼征、皮损以及甲状腺肢端病；且GD在家族中可见到先后发病的病例，其与遗传基因有密切的联系，科学家推测GD可能是一种受到人类白细胞抗原(HLA)基因调控的疾病。HLA是人类的主要组织相容性复合体(MHC)的表达产物，具有224个基因座，并且已经发现了2000多个等位基因，是人类迄今为止最复杂的基因群，根据分布和功能可将其分为Ⅰ类抗原和Ⅱ抗原。其中，II类抗原主要分布在抗原呈递细胞、胸腺上皮细胞和活化的T细胞表面，由6号染色体上的HLA-D区编码，其包括HLA-DPB、HLA-DQB以及HLA-DRB等类型，是由一条被糖基化的α重链和β轻链非共价结合而成的异源二聚体糖蛋白。根据II类抗原的位置，可将其分为胞外区、跨膜区以及胞内区；其中，胞外区可进一步分为肽结合区以及多肽性区，II类抗原的抗原多态性取决于多肽性区上的β1结构域。II类抗原的肽结合区和多态性区协作配合结合、提呈外源性抗原肽给CD4⁺T细胞，具有调节T细胞分化的功能。

据研究表明，GD患者体内出现异常的自身免疫反应，B细胞分泌甲状腺刺激性免疫球蛋白(TSAb)，TSAb与甲状腺滤泡细胞结合诱导甲状腺激素不受控制地分泌，使得炎症细胞浸润到甲状腺组织，导致甲状腺炎症的发生；同时，患者体内还会分泌抑制性促甲状腺激素结合免疫球蛋白(TBII)，TBII对B细胞分泌TSAb起负反馈调节作用。因此在一般的GD患者体内可检测到TSAb以及TBII阳性，但是在最近的研究中发现具有HLA-A*0201、HLA-A*0207以及HLA-DPB*0202等基因的患者血液中呈TBII阴性，且TBII呈阴性的患者在临床治疗中的治疗效果比呈阳性的患者的效果好，依据TBII可将GD分为典型性和非典型性，借助对HLA-A*0201、HLA-A*0207以及HLA-DPB*0202等基因的检测可实现对GD的分类。

基因扩增是分子生物学领域的基本研究手段之一，传统的聚合酶链式反应(PCR)以及在基础上发展起来的Sanger测序法、荧光PCR等技术能够实现对生物体核酸的有效扩增与检测。

目前，对于HLA-DPB*0202基因的检测一般采用Sanger测序法，Sanger测序法利用因双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)缺乏PCR延伸所需的3’-OH导致链延伸终止的原理。但是Sanger测序法通过进行多次扩增得到多段DNA片段，且需要对扩增得到的DNA进行电泳，操作较为繁琐，检测所需要的时间长。

发明内容

为了对HLA-DBP*0202基因进行快速检测，缩短检测时间，本申请提供一种用于HLA-DPB*0202基因检测的引物组、试剂盒及其方法。

第一方面，本申请提供的一种用于HLA-DPB*0202基因LAMP检测的引物组采用如下的技术方案：

一种用于HLA-DPB*0202基因检测的引物组，包括前向外引物F3、前向内引物FIP、后向外引物B3以及后向内引物BIP；

所述前向外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述前向内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；