[发明专利]一种冠突散囊菌培养基及冠突散囊菌平板计数方法

说明书

本发明提供一种冠突散囊菌培养基及冠突散囊菌平板计数方法，冠突散囊菌培养基的成分及含量为：蛋白胨3‑7g，葡萄糖8‑12g，蔗糖18‑23g，磷酸二氢钾0.7‑1.3g，硫酸镁0.2‑0.7g，琼脂13‑18g，孟加拉红0.01‑0.05g，氯霉素0.05‑0.2g，氯化钠10％‑15％，氯化锂5‑7g，各成分混合后，调节pH至7.2±0.2。本发明通过发明一种新的冠突散囊菌培养基，不但能够抑制细菌，同时又能够控制部分真菌的生长，同时控制菌落的蔓延，在此冠突散囊菌培养基上，冠突散囊菌具有相对独特的菌落特征，很容易的从其他真菌中分离开来，通过后续对应的冠突散囊菌平板计数方法，能够解决目前茯砖茶中冠突散囊菌没有专门定量计数方法的问题。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，特别涉及一种冠突散囊菌培养基及冠突散囊菌平板计数方法。

背景技术

黑茶中最具特色的是茯砖茶，茯砖茶里的益生菌冠突散囊菌对茯砖茶的茶叶品质有着重要影响。茯砖茶是中国特有的茶品种，在现行国家标准GB/T9833.3-2013规定：茯砖茶的合格标准为冠突散囊菌数≥200000CFU/g，但目前国内外尚无检测冠突散囊菌的检测标准，故GB/T 9833.3只能暂时指定标准GB4789.15(国家食品检验标准霉菌和酵母菌计数)来检测冠突散囊菌；GB4789.15以马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红培养基来培养霉菌，以上2种霉菌培养基对霉菌没有任何的选择性，虽然冠突散囊菌属于霉菌，但霉菌和酵母菌里存在很多致病菌，比如有剧毒的黄曲霉菌落颜色在霉菌计数平板上也是黄色的，非常容易混淆，用霉菌和酵母菌计数方法来检测冠突散囊菌不仅不准确而且可能出现重大安全事故。因此，研究一种快速且方便冠突散囊菌的定量检测方法是行业内的一种迫切需求，为此，本发明提出一种冠突散囊菌培养基及冠突散囊菌平板计数方法。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种冠突散囊菌培养基及冠突散囊菌平板计数方法，该冠突散囊菌培养基及冠突散囊菌平板计数方法设计合理，能够解决目前茯砖茶中冠突散囊菌没有专门定量计数方法的问题，本发明通过发明一种新的冠突散囊菌培养基，不但能够抑制细菌，同时又能够控制部分真菌的生长，同时控制菌落的蔓延，在冠突散囊菌培养基上，冠突散囊菌具有相对独特的菌落特征，很容易的从其他真菌中分离开来，通过简单的初筛鉴定就能够得到冠突散囊菌计数结果，如果要更精确的鉴定，因为冠突散囊菌在本发明的培养基上能够和散囊菌属内其他各种真菌明显的区分开来，所以只要鉴定典型菌落的ITS核酸序列，确定该菌落属于散囊菌属，就能确证该菌落为冠突散囊菌。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种冠突散囊菌培养基，其成分及含量为：蛋白胨3-7g，葡萄糖8-12g，蔗糖18-23g，磷酸二氢钾0.7-1.3g，硫酸镁0.2-0.7g，琼脂13-18g，孟加拉红0.01-0.05g，氯霉素0.05-0.2g，氯化钠10％-15％，氯化锂5-7g，各成分混合后，调节pH至7.2±0.2。

一种冠突散囊菌平板计数方法，具体步骤如下：

步骤一：样品的准备；选用适量的茶叶样品备用，取用适量的冠突散囊菌培养基原料备用；

步骤二：样品的均质；将茶叶样品用无菌粉碎机粉碎，用四分法称取粉碎后的适量样品备用；

步骤三：样品的稀释；具体步骤如下：

①：以无菌吸管吸取25mL粉碎样品至盛有225mL无菌稀释液的适宜容器内或无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打1min-2min，制成1：10的样品匀液；

②：取1mL 1：10样品匀液注入含有9mL无菌稀释液的试管中，另换1支1mL无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合器上混匀，此液为1：100的样品匀液；

③：制备10倍递增系列稀释样品匀液，每递增稀释一次换用1支1mL无菌吸管；