[发明专利]一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法

说明书

本发明涉及转录因子技术领域，且公开了一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法包含诱饵克隆：pGADT7‑A、诱饵载体：pGADT7、文库酵母质粒：motif、Clontech酵母单杂交系统、培养基、贮备液，该筛选与转录因子A相互作用的motif方法，将诱饵质粒转化受体菌Y187中及其自激活检测包含有酵母转化、酵母转化方法、自己活检测三个方面，所述自激活检测后选用80mM 3AT进行后续筛库浓度，文库筛选是用含有pGADT7‑A诱饵质粒的Y187酵母菌株作为受体菌制备感受态，将motif文库质粒转入其中，涂布于含80mM 3AT的SD‑TLH筛选平板，所述文库筛选包含有文库DNA转化方法，酵母阳性克隆回转验证的回转验证结果筛选得到的6种motif能在SD‑TL、SD‑TLH、SD‑TLH+80mM 3AT平板上生长，从而筛选得到与A作用的motif。

技术领域

本发明涉及转录因子技术领域，具体为一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法。

背景技术

转录因子是一群能与基因5`端上游特定序列专一性结合，从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子，真核生物转录起始过程十分复杂，往往需要多种蛋白因子的协助，转录因子与RNA聚合酶Ⅱ形成转录起始复合体，共同参与转录起始的过程，根据转录因子的作用特点可分为两类；第一类为普遍转录因子，它们与RNA聚合酶Ⅱ共同组成转录起始复合体时，转录才能在正确的位置开始，除TFⅡD以外，还发现TFⅡA，TFⅡB，TFⅡF，TFⅡE，TFⅡH等，它们在转录起始复合体组装的不同阶段起作用，第二类转录因子为组织细胞特异性转录因子，这些TF是在特异的组织细胞或是受到一些类固醇激素\生长因子或其它刺激后，开始表达某些特异蛋白质分子时，才需要的一类转录因子，转录因子的构建已用于转录因子的生物学功能研究中起到重要作用，为此现提出一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法，具备以构建到pGADT7载体上的A基因为诱饵，筛选酵母单杂交motif文库，经过对阳性克隆的基因检测、DNA测序和比对分析，确定与pGADT7-A相互作用的motif的优点，解决了转录因子构建过程中遇到的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种筛选与转录因子A相互作用的motif方法，包括以下材料：

诱饵克隆：pGADT7-A

诱饵载体：pGADT7

文库酵母质粒：motif

Clontech酵母单杂交系统

培养基

贮备液。

优选的，所述培养基包含：0.5％Yeast extract，1％Polypeptone，1％NaCl大肠杆菌培养基、1％Yeast extract，2％Tryptone，2％Glucose,0.02％Adenine酵母完全培养基、酵母缺陷型筛选培养基，所述贮备液为10×TE：0.1M Tris-HCl(pH7.5)，10mM EDTA，高压灭菌与10×LiAc：1M LiAc(pH7.5)，高压灭菌。

优选的，包含有将诱饵质粒转化受体菌Y187中及其自激活检测、文库筛选、酵母阳性克隆鉴定及测序比对、酵母阳性克隆回转验证四部分。

优选的，所述将诱饵质粒转化受体菌Y187中及其自激活检测包含有酵母转化、酵母转化方法、自己活检测三个方面，所述自激活检测后选用80mM3AT进行后续筛库浓度。