[发明专利]外泌体miR-17-5p在制备重症肺炎的检测产品中的应用

说明书

本发明公开了外泌体miR‑17‑5p在制备重症肺炎的检测产品中的应用，所述外泌体为支气管肺泡灌洗液中的外泌体。本发明利用分子生物学技术，基于外泌体中miR‑17‑5p的表达水平快速、准确地将重症肺炎患者从无呼吸道感染者中检测出来，具有很好的应用前景和推广价值：特异性强：直接提取支气管肺泡灌洗液中的外泌体，其内容物组成受肺组织病理生理改变的影响最直接；灵敏度高：RT‑qPCR检测方法灵敏度高，可高效识别重症肺炎患者；高效快速：现代分子生物学技术发展迅速，可以实现快速准确地检测miR‑17‑5p的水平；准确性高：引物与靶序列特异性结合，保证了RT‑qPCR扩增结果的高度准确性，从而提高了检测重症肺炎患者的准确性。

技术领域

本发明涉及重症肺炎分子检测技术领域，具体地，涉及外泌体miR-17-5p在制备重症肺炎的检测产品中的应用。

背景技术

重症肺炎是重症监护室(ICU)最常见的呼吸系统急危重症，因不同病因、不同病原菌、在不同场合所导致的肺组织(细支气管、肺泡、间质)炎症，有着相似或相同的病理生理过程，发展到一定疾病阶段，均可恶化加重成为重症肺炎引起器官功能障碍甚至危及生命。相关研究表明，重症肺炎的病死率高达30％～50％，并可导致严重的并发症如急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脓毒症等加重医疗经济负担。根据世界卫生组织(WHO)统计，下呼吸道感染(LRTIs)是全球第四大死亡原因，导致2019年全球260万人死亡，是最致命的传染病且LRTIs是低收入国家最常见的死亡原因，而肺炎是高收入经济体中十大死亡原因中唯一的感染性疾病。随着当前新型冠状病毒肺炎的大流行，肺炎是一个主要的全球临床和公共卫生问题的事实再次引起了全世界的关注。

目前，重症肺炎的初步诊断是基于提示性临床特征，如发热、呼吸短促、痰多、咳嗽和白细胞增多，并辅以胸部X线或计算机断层扫描(CT)中发现的肺实变证据，以得出最终诊断。在某些情况下，还可以通过尿液抗原检测、分子检测、血清学或支气管镜检查来支持诊断。然而，针对肺部感染，异常临床表现和肺部影像学均具有滞后性，尤其是在高风险群体例如老年人或婴幼儿，他们通常表现出非典型症状，若早期诊断和治疗干预不及时极易并发败血症或急性呼吸衰竭。此外，已知的生物标志物如红细胞沉降率、降钙素原和C反应蛋白缺乏足够的特异性，重症肺炎的早期诊断形势依然严峻。

外泌体是源于内体系统的纳米级细胞外囊泡(30nm-150nm)，具有脂质双层膜结构。几乎所有类型的细胞均能产生，并广泛分布于唾液、血浆、乳液、脑脊液、尿液和支气管肺泡灌洗液等体液中。外泌体携带与细胞来源有关的多种蛋白质、脂质和核酸等，且其内容物组成因细胞起源和细胞的生理状态而不同。MicroRNAs(miRNAs)是外泌体的重要成分之一，越来越多的证据表明，miRNAs是选择性的整合到外泌体中，而不是随意包裹其中。亲代细胞具有一种引导特定细胞内miRNAs进入外泌体的分选机制。这些特性表明，外泌体miRNAs具有作为诊断生物标志物的巨大潜力。与传统生物标志物相比，外泌体具有广泛性、稳定性及可修饰性的优势；与蛋白质标志物相比，miRNAs具有独特的优点，例如，在不同途径中差异表达的多种miRNAs的组合将提供比蛋白质标记物更多的信息，且比开发针对特定蛋白质的特定抗体更省时省力。最重要的是，以核酸扩增技术为基础的分子生物学技术的迅速发展，可以快速准确地检测miRNAs水平，为基于外泌体miRNAs表达水平的诊断提供了快速、灵敏、特异及稳定的检测方法。

现有技术中公开了儿童腺病毒肺炎相关的外泌体miRNA及应用，该miRNA可以很好地区分儿童腺病毒肺炎和正常儿童。但目前还未有针对于重症肺炎的外泌体miRNA检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供外泌体miR-17-5p在制备重症肺炎的检测产品中的应用。本发明基于检测支气管肺泡灌洗液中外泌体miR-17-5p的表达水平，实现快速特异性识别重症肺炎患者的检测。

本发明的第一个目的是提供外泌体miR-17-5p在制备重症肺炎的检测产品中的应用。