[发明专利]一种脐带间充质干细胞因子冻干粉及其制备方法

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞因子冻干粉，其特征在于，该冻干粉包括脐带间充质干细胞因子提取液和冻干辅助剂；其中，冻干辅助剂包括：甘露醇、维生素C衍生物、胶原蛋白和二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐。

2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉，其特征在于，冻干辅助剂各组分在细胞因子提取液中的体积分数为：甘露醇为5-10％、维生素C衍生物为0.5-1％、胶原蛋白为0.5-1％、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐为0.1-0.5％。

3.根据权利要求2所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉，其特征在于，冻干辅助剂各组分在细胞因子提取液中的体积分数为：甘露醇为6％、维生素C衍生物为0.5％、胶原蛋白为0.5％、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐为0.2％。

4.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉，其特征在于，脐带间充质干细胞因子提取液通过以下方法制得：分离脐带上的华通氏胶，离体培养得P0代脐带间充质干细胞，再用无血清培养基培养，直到80-90％融合度后，用胰酶消化成单个细胞，经传代培养，直至第5代，收集P5代细胞培养上清液和P5代细胞裂解物上清液，制得脐带间充质干细胞因子提取液。

5.根据权利要求4所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉，其特征在于，所述离体培养为将分离的华通氏胶剪碎，将组织碎片于35-39℃和4-6％CO₂条件下培养4-6d后，首次换液培养，然后每1.5-2.5d半量换液培养，当组织块周围出现贴壁生长的细胞时，去除组织块，得到P0代脐带间充质干细胞。

6.根据权利要求4所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉，其特征在于，所述P5代细胞裂解物上清液通过以下方法制得：将P5代细胞经消化、清洗后，用生理盐水重悬细胞，然后于-75～-85℃冷冻2-4h，再于3-5℃融化，重复冷冻融化过程2-4次后，离心，收集细胞裂解物上清液。

7.权利要求1-6任一项所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在脐带间充质干细胞因子提取液中，加入冻干辅助剂，待混匀后，于-75～-85℃预冻10-15h，制得冻干液；

(2)将冻干液进行冷冻干燥，制得脐带间充质干细胞因子冻干粉。

8.根据权利要求7所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的冷冻干燥为：将冻干液置于-35～-45℃，开始降温至-50～-55℃保持0.5-1h；然后开始一次干燥过程：抽真空，真空度控制为0.1-0.3mbar，-50～-55℃升温至-25～-35℃，保持4.5-5.5h；-25～-35℃升温至-10～-20℃，保持5-6h；-10～-20℃升温至-3～-8℃，保持3.5-4.5h；-3～-8℃升温至-1～1℃，保持1.5-2.5h；二次干燥过程：-1～1℃升温至25～35℃，保持3.5-4.5h。

9.根据权利要求8所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，冷冻干燥为：将冻干液置于-40℃，开始降温至-50℃保持1h；然后开始一次干燥过程：抽真空，真空度控制为0.2mbar；-50℃升温至-30℃，保持5h；-30℃升温至-15℃，保持5.5h；-15℃升温至-5℃，保持4h；-5℃升温至0℃，保持2h；二次干燥过程：0℃升温至30℃，保持4h。

10.权利要求1-6任一项所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉在皮肤抗衰老、美容方面的应用。