[发明专利]一种凝血酶响应的DNA纳米机器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种凝血酶响应的DNA纳米机器，其特征在于，所述凝血酶响应的DNA纳米机器包括DNA纳米结构、tPA-ssDNA复合物和凝血酶适配体链；所述DNA纳米结构包含DNA模板链、DNA订书钉链和DNA功能链；所述DNA订书钉链用于辅助折叠DNA模板链完成组装；所述DNA功能链包括DNA捕获链和DNA“锁扣”链；所述DNA捕获链由在DNA订书钉链的5’端加上与tPA-ssDNA复合物的DNA序列互补杂交的捕获序列形成，用于捕获tPA-ssDNA复合分子；所述DNA“锁扣”链由DNA纳米结构两端的DNA订书钉链的5’或3’端加上与凝血酶适配体链序列部分或完全互补杂交的序列形成；所述DNA“锁扣”与凝血酶适配体链杂交形成三链杂交结构；所述凝血酶适配体链为一段可以特异性识别凝血酶的DNA序列；

所述DNA模板链为M13mp18噬菌体基因组DNA，所述M13mp18噬菌体基因组DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的DNA纳米机器，其特征在于，每个DNA纳米结构锚定24条DNA捕获链，每3条DNA捕获链捕获一个tPA-ssDNA复合分子。

3.根据权利要求2所述的DNA纳米机器，其特征在于，所述tPA-ssDNA复合物的ssDNA序列如SEQ ID NO:2所示，所述24条DNA捕获链分别序列如SEQ ID NO:3-26所示。

4.根据权利要求1所述的DNA纳米机器，其特征在于，所述凝血酶适配体链的核苷酸序列如SEQ ID NO:27所示。

5.根据权利要求1所述的DNA纳米机器，其特征在于，所述锁扣链有6对，每条锁扣链与凝血酶适配体链有两个碱基错配位点。

6.根据权利要求5所述的DNA纳米机器，其特征在于，所述“锁扣”链序列分别如SEQ IDNO:28-39所示。

7.根据权利要求1-6任一项所述的DNA纳米机器，其特征在于，所述DNA纳米机器为管状三维结构，所述管状三维结构的底部直径为19 nm，长为90 nm。

8.权利要求1所述的DNA纳米机器的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤一：将DNA模板链、DNA订书钉链和DNA功能链按比例混合于缓冲液中，退火，超滤纯化得到矩形平板DNA纳米结构；

步骤二：将步骤一得到的所述矩形平板DNA纳米结构与tPA-ssDNA复合物按比例混合后退火；

步骤三：将步骤二得到的退火产物与凝血酶适配体链按比例混合后退火；将得到的退火产物超滤纯化置换缓冲液，得到所述管状DNA纳米机器。

9.权利要求1所述的DNA纳米机器在制备治疗静脉血栓药物中的应用。