[发明专利]抗萎锈灵草菇及其遗传转化方法

权利要求书

1.抗萎锈灵草菇的遗传转化方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）配制质量体积浓度0.5-3%的裂解酶酶液，加入小块的草菇子实体，30-35℃酶解0.5-3.5h，收集所得原生质体；

（2）取步骤（1）所得原生质体，依次加入STC溶液、如SEQ. ID. NO. 1所示的含有抗萎锈灵基因的片段，以及PTC缓冲液，混匀，室温放置2-10min，离心去除上清；加入预冷的CYM液体培养基，混匀后加入CYM固体培养基中，倒平板，30-35℃培养18-24h后；加铺一层含有4μg/ml 萎锈灵的PDA培养基，能够萌发的原生质体为抗萎锈灵的草菇；

步骤（2）中，所述原生质体浓度为 (0.1-1.0)×10⁸/mL；

步骤（2）中，所述含有抗萎锈灵基因的片段，是将如SEQ. ID. NO. 1所示的核苷酸连接到pMD18-T载体，采用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切，回收含有抗萎锈灵基因的片段。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的裂解酶酶液，其质量体积浓度为2%。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述裂解酶酶液的配制方法如下：称取0.2g裂解酶，加入250μl 0.2M pH值5.7的MES缓冲液、7.5ml 0.8M的甘露醇溶液、1.7mlddH₂O，混匀。

4.一种抗萎锈灵的草菇，其特征在于由权利要求1-3任一项所述的遗传转化方法制得。