[发明专利]利用加热速率调控牛肉肌球蛋白自组装聚集行为与凝胶特性的方法

权利要求书

1.一种利用加热速率调控牛肉肌球蛋白自组装聚集行为与凝胶特性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）牛肉肌球蛋白的提取：

在250 g新鲜牛肉块中加入1 L Solution A溶液并进行匀浆，然后于10000 rpm条件下均质15s/次，共4次。

2.用单层纱布过滤后离心（3000 Íg，4 ℃，10 min）；收集沉淀再次加入1 L SolutionA，均质（10000 rpm，15 s/次，4次）后离心（3000 Íg，4 ℃，10 min）；收集沉淀溶于1 LSolution B后均质（10000 rpm，15 s/次，4次），4 ℃静置15 min后离心（3000 Íg，4 ℃，10min），收集上清，并用3层纱布过滤，在滤液中加入9 L蒸馏水，4 ℃沉降4 h后再次离心（3000 Íg，4 ℃，10 min）；收集沉淀溶于1 L Solution C后均质（10000 rpm，15 s/次，4次）；将所有液体转移至3 L烧杯中，加入5 mmol/L MgCl₂和Na₄P₂O₇，再加入1 L蒸馏水，用0.5 mol/L K₂HPO₄将液体pH调至6.55后离心（10000 Íg，4 ℃，20 min）；收集上清液，加入约20 L蒸馏水，4 ℃沉降过夜后离心（8000 Íg，4 ℃，20 min），收集沉淀即为肌球蛋白;

（2）牛肉肌球蛋白热诱导凝胶的制备：

将所得的肌球蛋白溶于磷酸盐缓冲液中，浓度调节至10 mg/mL，称取样品2 g置于5mL量杯中，将量杯置于1、2、3和5 ℃/min的加热速率下，从25 ℃加热至75 ℃并保温10 min，将加热好的肌球蛋白凝胶放入4 ℃的冰箱中过夜。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Solution A（pH 7.0）由0.1 mol/LTris-HCl和20 mmol/L EDTA·2Na混合制成；所述Solution B（pH 6.4）由0.1 mol/LKH₂PO₄/K₂HPO₄, 0.4 mol/L KCl, 10 mmol/L Na₄P₂O₇, 1 mmol/L MgCl₂和2 mmol/L EGTA混成制成；所述Solution C（pH 7.0）由50 mmol/L KH₂PO₄/K₂HPO₄, 0.6 mol/L KCl和20mmol/L EDTA·2Na混合制成。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液（pH 7.0）为20 mMNa₂HPO₄/NaH₂PO₄和0.6 M NaCl混合制成。