[发明专利]一种快速检测肺癌肿瘤标志物的免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种快速检测肺癌血清肿瘤标志物的免疫层析试纸条及其制备方法，所述试纸条包括底板，所述底板上依次排列样品垫、金标垫、NC膜及吸水纸；所述NC膜粘附于底板上，自吸水纸方向依次设置质控线（C线），细胞角蛋白19片段检测线（T1线）和癌胚抗原检测线(T2线)；所述金标垫和样品垫设置在NC膜下端，吸水纸设置在NC膜上端，所述样品垫、金标垫、NC膜和吸水纸重叠设置。本试纸可以快速实现全血中的细胞角蛋白19片段（CYFRA21‑1）、癌胚抗原（CEA）的同时检测，操作简易，可视化的结果判读，灵敏度高、特异性强，成本低，无需专业人员和大型仪器，适用于肺癌高风险人群的监测及肺癌术后预后，不受地域和时间的限制，适用于家庭和社区。

技术领域

本发明专利涉及一种快速检测肺癌肿瘤标志物的免疫层析试纸条及其制备方法，应用于临床检测领域。

背景技术

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率位居全球及中国恶性肿瘤的首位。肺癌按细胞形态特征与分化程度可分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，其中非小细胞肺癌占所有肺癌的80％～85％。早期肺癌患者症状较轻，临床表现不明显，晚期肺癌患者预后较差，总体5年生存率仅为19.7％，严重影响我国居民的生命健康。早诊断早治疗是提高肺癌患者生存率、减轻经济负担的关键。

目前，肺癌的临床诊断手段包括肺穿刺活检、影像学病理诊断(CT、X射线、MRI)、细胞学检查、血液肿瘤标志物检查、肺支气管镜检查等。早期肺癌患者异常表现不明显，影像学检查特异性较低，常常无法辨别肺部良性结节与早期肺癌。且对于早期患者而言，细胞学检查及穿刺活检等有创检查的阳性率低且反复取材困难，血清肿瘤标志物检查是临床肺癌重要的辅助检测方法，血清肿瘤标志物属于肿瘤细胞增殖中合成、释放或肿瘤与宿主细胞相互作用而形成的一类物质，指示着肿瘤的发生发展。临床上可通过化学、免疫、分子生物学或蛋白组学方法，在血液、尿液、脑脊髓液等体液中检测该类物质，其在肿瘤疾病诊断及病情分期中均具有重要价值。

癌胚抗原(CEA)为广谱性的肿瘤标志物，正常人血清中含量极低，小于5ng/ml，CEA水平升高常见于大肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。临床报道显示，30％～70％的非小细胞肺癌(NSCLC)患者CEA水平升高，且常见于腺癌与晚期鳞癌。因此，CEA水平升高可作为肺癌诊断的依据。

细胞角蛋白-19片段(CYFRA21-1)属细胞角蛋白家族，当肿瘤细胞被破坏/死亡时，大量可溶性CYFRA21-1片段释放入血，使血液中CYFRA21-1水平升高。目前，CYFRA21-1被认为是一种主要用于检测肺癌的肿瘤标记物，尤其对非小细胞肺癌中的鳞癌，特异性较高。血清CYFRA21-1诊断临界值一般为3.3μg/L，其检测灵敏度为51％～77％，特异性为87％～96％，各类非小细胞肺癌阳性检出率为70％～85％。是监测肺癌患者病情、提示预后的良好指标。

肿瘤标志物对肿瘤的早期筛查、鉴别诊断、预后判断具有极其重要的意义，但单一肿瘤标志物的检测灵敏度和特异性肺癌有着不同的表现，联合检测可以提高检测的灵敏度。研究表明，CEA和CYFRA21-1联合检测是对于非小细胞肺癌的最佳标志物组合，两者均可作为独立的肺癌预后指标，且其水平和预后发展密切相关，多项研究考察了两者组合对于非小细胞肺癌的预后预测效果，认为两者组合是非小细胞肺癌预后的预测因素，对疗效的预测和病程的检测均有重大意义。

因此，我们建立了基于胶体金免疫层析原理的癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)两联免疫层析试纸条，可同时检测全血或血清中的CEA和CYFRA21-1，具有操作简单、检测快速、成本低廉且无需检测仪器等优点，用于肺癌的预后预测和病程检测。

发明内容

针对现有问题的不足，本发明的目的是提供一种快速检测肺癌肿瘤标志物的免疫层析试纸条及其制备方法。本发明提供的免疫层析试纸条灵敏度高，特异性好，检测快速，成本低廉，实现CYFRA21-1和CEA的快速检测，检测限分别为3.3ng/ml(CYFRA21-1)以及5ng/ml(CEA)，可用于肺癌的辅助诊断和肺癌病人的预后监测。