[发明专利]一种用于大麻复合鉴定多态性遗传标记的引物组合物、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于大麻复合鉴定多态性遗传标记的引物组合物，其特征在于，包括大麻17个常染色体STR基因座的扩增引物和2个性别鉴定位点的扩增引物；其中，所述17个常染色体STR基因座包括D02-CANN1、C11-CANN1、4910、B01-CANN1、E07-CANN1、9269、B05-CANN1、H06-CANN2、5159、nH09、ANUCS 501、CS1、ANUCS 305、3735、ANUCS 302、1528和9043，所述2个性别鉴定位点为DM029和DM016。

2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述大麻17个常染色体STR基因座的扩增引物和2个性别鉴定位点的扩增引物的序列具体如下：

D02-CANN1：SEQ ID NO.1-2；C11-CANN1：SEQ ID NO.3-4；DM029：SEQ ID NO.5-6；DM016：SEQ ID NO.7-8；4910：SEQ ID NO.9-10；B01-CANN1：SEQ ID NO.11-12；E07-CANN1：SEQ ID NO.13-14；9269：SEQ ID NO.15-16；B05-CANN1：SEQ ID NO.17-18；H06-CANN2：SEQID NO.19-20；5159：SEQ ID NO.21-22；nH09：SEQ ID NO.23-24；ANUCS 501：SEQ ID NO.25-26；CS1：SEQ ID NO.27-28；ANUCS 305：SEQ ID NO.29-30；3735：SEQ ID NO.31-32；ANUCS302：SEQ ID NO.33-34；1528：SEQ ID NO.35-36；9043：SEQ ID NO.37-38。

3.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，每对扩增引物中至少一条引物采用荧光染料标记，所述荧光染料选自FAM、HEX、TRMRA、ROX中的一种。

4.根据权利要求3所述的引物组合物，其特征在于，D02-CANN1、C11-CANN1、DM029、DM016、4910、BO1-CANN1的扩增引物采用FAM标记；E07-CANN1、9269、B05-CANN1、H06-CANN2、5159、nH09的扩增引物采用HEX标记；ANUCS501、CS1、ANUCS 305的扩增引物采用TRMRA标记；3735、ANUCS 302、1528、9043的扩增引物采用ROX标记。

5.一种包括如权利要求1-4任一项所述引物组合物的用于大麻复合鉴定多态性遗传标记的试剂盒，其特征在于，还包括4×PCR反应预混液Ⅶ、去离子水。

6.采用如权利要求1-4任一项所述引物组合物或者如权利要求5所述试剂盒的用于大麻复合鉴定多态性遗传标记的方法，其特征在于，具体用于大麻性别鉴定、个体识别和来源地推断；所述方法包括如下步骤：

步骤一，采用SEQ ID NO.1-38所示序列的扩增引物对待测样品的基因组DNA样本进行PCR复合扩增；

步骤二，取PCR扩增产物与适量的分子量内标、甲酰胺混匀；将混合物变性、冷却；

步骤三，采用遗传分析仪进行分型检测。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR复合扩增的扩增体系的总体积为10μL，包括：4×PCR反应预混液Ⅶ2.5μL，10×引物混合物1μL，去离子水5.5μL，1ng/μL基因组DNA 1μL。