[发明专利]杭白菊PCR鉴定试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种杭白菊PCR鉴定试剂盒及应用，所述试剂盒中的特异性引物为HBJ893‑1和HBJ893‑2。HBJ893‑1：5’‑ACTACACGAAG AATGAGTAGGCAGC‑3’,HBJ893‑2:5’‑GAACTAC GAAACTAACCCGACACG‑3’。本发明提供了一种快速、准确鉴定杭白菊的方法，可以广泛应用于杭白菊中药选种育种、种植、采收储存、销售、临床应用各环节的品种鉴定，在鉴别中药真伪，打击伪品，加强中药质量监管，促进中药现代化发展方面具有重大意义。

(一)技术领域

本发明涉及一种DNA分子鉴定方法，特别涉及中药杭白菊PCR鉴定试剂盒、特异性引物、模板及鉴定方法。

(二)背景技术

菊花为菊科菊属植物菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的干燥头状花序，道地产地为浙江桐乡、河南焦作、安徽滁州、安徽亳州、安徽歙县等。药菊的品种包括杭白菊、怀菊、滁菊、亳菊、贡菊。菊花含挥发油、菊甙、腺嘌呤、胆碱、氨基酸、黄酮类、酚酸类及刺槐素等活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎、降血压、散风清热、平肝明目等功效，可用于治疗风热感冒，头痛眩晕，目赤肿痛，眼目昏花等病症。不同的药菊品种，其有效成分和药效差别较大。由于药菊品种较多，来源多样，外观形态类似，单靠外形和传统中药检测方法较难区别，需建立一种新型的鉴定方法。

本发明提供的PCR检测法是一种杭白菊的DNA分子鉴定方法，能够准确鉴定杭白菊。利用PCR检测法对杭白菊进行鉴定尚未见报道。该方法的建立对实现中药现代化，规范管理药菊的种植，采摘和销售，具有重要意义。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种能够准确鉴定中药杭白菊的PCR鉴定试剂盒和检测方法，包括PCR检测法关键试剂PCR引物、模板和PCR检测法的检测步骤，解决了中药杭白菊较难区别的问题。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种杭白菊PCR鉴定试剂盒，所述试剂盒中的特异性引物为HBJ893-1和HBJ893-2：

HBJ893-1:5’-ACTACACGAAGAATGAGTAGGCAGC-3’(SEQ ID NO.2)；

HBJ893-2:5’-GAACTACGAAACTAACCCGACACG-3’(SEQ ID NO.3)。

进一步，所述的杭白菊PCR鉴定试剂盒的组成为：

本发明还涉及一种所述杭白菊PCR鉴定试剂盒在杭白菊鉴定中的应用，所述应用的方法为：

(1)模板DNA的提取和质量鉴定：采用常规提取法提取样品DNA作为PCR模板；以电泳法检测模板DNA的质量(检测方法同步骤(3))，条带清晰无弥散的，即为符合PCR反应的模板DNA；

(2)PCR鉴定：利用杭白菊PCR鉴定试剂盒中的特异性引物HBJ893-1和HBJ893-2进行PCR扩增：

PCR反应溶液：

将PCR反应溶液放入PCR扩增仪中进行PCR扩增反应，反应程序设置为：93℃预变性3min，93℃变性1min，58～62℃复性1min，72℃延伸2min，40个循环，最后72℃延伸10min；

(3)PCR产物进行电泳检测：取出PCR扩增产物(即扩增反应后的反应液)10μL与加样缓冲液1μL混合，用1.2％琼脂糖凝胶电泳(含0.5％溴化乙锭)检测扩增结果，在893bp处出现扩增条带为杭白菊，在893bp处不出现扩增条带不是杭白菊。