[发明专利]脱细胞真皮复合成纤维细胞外泌体修复材料及其制备方法

说明书

本发明公开了一种脱细胞真皮复合成纤维细胞外泌体修复材料及其制备方法。由脱细胞真皮滴加成纤维细胞外泌体后冻干制成。本发明在传统异种脱细胞真皮基质的基础上，复合皮肤成纤维细胞外泌体，形成一种新的复合修复材料，由于脱细胞真皮基质可为创伤面的修复提供良好的空间胶原支架结构，外泌体可增强创伤面处皮肤成纤维细胞的迁移、增殖、分泌以及新生血管的生成，因此，该复合修复材料有利于加速创伤面的愈合和修复。

技术领域

本发明属于创伤修复材料技术领域，具体涉及一种脱细胞真皮复合皮肤成纤维细胞外泌体修复材料及其制备方法。

背景技术

皮肤是人体低于外界损伤的第一道屏障，是人体最大、最复杂的器官。在医学烧伤及整形专科临床中，皮肤是严重创伤及大面积烧伤最易受损的器官，大面积皮肤缺损会引起体液丧失、水电解质紊乱及低蛋白血症、严重感染等问题，在治疗的关键即为皮肤移植。目前，临床上使用最广泛为为同种异体脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)，其为一种真皮支架材料，通过去除同种异体全厚皮中的表皮层以及真皮层中的细胞成分，仅保存完整胶原纤维网架结构的真皮细胞外基质而成。脱细胞真皮基质含有正常胶原框架结构及完整基底膜，且具有低免疫原性、低毒性等人体植入物特性，几乎不引起宿主的排斥反应，可以在宿主体内长期存留，可以促进表皮细胞、成纤维细胞和内皮细胞的增殖和分化，是理想的支架材料。由于同种异体真皮来源有限，无法满足人民群众日益增长的使用需求，故而研究的重点开始转向使用异种皮肤脱细胞真皮基质，通过脱细胞和冷冻干燥处理，可使基质抗原性极低，生物相容性优良，能够最大限度模拟人体皮肤的组织结构，更好地诱导宿主细胞的生长和皮肤胶原的重建。目前国内已有数家公司取得了相关的产品注册证并用于临床使用。

创面愈合是一个复杂的生物学过程，通常为成纤维细胞增殖分化、新生血管的形成、细胞外基质纤维化和表皮细胞增生覆盖创口等综合作用的结果。在这个过程中，各种生长因子、胶原蛋白、外泌体等多种功能性物质可促进或抑制细胞的增殖与分化，同时也是介导细胞与细胞相互作用和交流的重要物质，它们影响着细胞的生长速度，引导和调整创伤愈合的反应。其中，外泌体于1983年首次在绵羊网织红细胞中被发现，1987年，Johnstone将其命名为“exosome”，其为细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中的膜囊泡，大小均一，直径在40-100nm，其大小取决于其起源部位以及细胞中的脂质双层结构。外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白。人体几乎所有类型的细胞都能分泌外泌体，外泌体广泛存在并分布于各种体液中，携带多种蛋白质、mRNA、miRNA和脂质类物质等，作为重要的传递信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统，可参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脱细胞真皮复合皮肤成纤维细胞外泌体修复材料及其制备方法。

一种脱细胞真皮复合皮肤成纤维细胞外泌体修复材料，由脱细胞真皮滴加成纤维细胞外泌体后冻干制成。

所述脱细胞真皮为异种脱细胞真皮。

所述异种脱细胞真皮的来源为猪、牛、马、羊或狗。

一种脱细胞真皮复合皮肤成纤维细胞外泌体修复材料的制备方法，取脱细胞真皮与皮肤成纤维细胞外泌体，按照每平方厘米脱细胞真皮加入1×10⁶-1×10¹²个/mL皮肤成纤维细胞外泌体的比例，在脱细胞真皮正面的四角和中心的位置均匀滴加总计1mL皮肤成纤维细胞外泌体，静置7-15分钟，在脱细胞真皮反面的四角和中心的位置同样均匀滴加总计1mL皮肤成纤维细胞外泌体，静置7-15分钟，将复合后的脱细胞真皮置于冻干机中进行冻干，即得脱细胞真皮复合皮肤成纤维细胞外泌体修复材料。

所述脱细胞真皮的制备方法如下：